新规 | 尼秦类滥用药物LC-MS/MS分析方案

2025-07-08 19:34:32, Restek 瑞思泰康科技（北京）有限公司上海分公司

前言

Restek LCC

苯并咪唑-阿片类药物（俗称“尼秦/nitazenes”）是近年来出现在非法药物市场上的合成阿片类药物的一个亚类。该类药物最早于 20 世纪 50 年代被合成，用于研究其镇痛特性，但未获批用于人类 ^[1]。此后数十年间，部分此类化合物陆续出现在非法药物市场，其中异丙托尼秦（isotonitazene）于 2019 年初在美国境内首次出现 ^[2]。我国也发现一些不法分子将其掺入“莫合烟”（呈绿色或黄色颗粒状烟丝）贩卖吸食，或用饮料浸泡后饮用。该类药物滥用会导致身体虚弱无力、恶心、呕吐等症状，严重的甚至会造成死亡。

6 月 19 日，国家禁毒办在京召开新闻发布会，发布《关于将尼秦类物质和三氟乙咪酯等 12 种物质列入<非药用类麻醉药品和精神药品管制品种增补目录>的公告》，决定将尼秦类物质和 12 种新精神活性物质纳入管制，加强监管和打击，严防滥用蔓延。

尼秦类化合物结构特征

Restek LCC Solution

尼秦类化合物一般由一个苯并咪唑环组成，其 1 位为乙胺基取代，2 位为苄基取代。对母核结构进行修饰可以产生一系列衍生物。图 1 展示了一些目前已知的尼秦类似物以及它们在结构上的差异，后续我们可能还会看到更多新的类似物出现。

图 1: 尼秦类药物的基本结构和已知的结构类似物

选定待测物清单

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尼秦类似物数量庞大，我们筛选了当前流行度最高的尼秦类化合物和血液、尿液中的主要代谢物 4‘-hydroxy Nitazene 作为目标分析物，其中的 Isotonitazene 和 Protonitazene 为结构异构体，详细信息见图 2。

图 2：选定的尼秦类药物清单

分析方法

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由于待测物的结构非常相近，且包含异构体，因此我们选择了 Raptor 联苯色谱柱作为分析柱。该色谱柱采用核壳颗粒保证高效分离，联苯基团提供的 π-π 作用使其更具结构识别能力，提升了对复杂分离的选择性。由于乙腈分子结构中含有 π 电子，会竞争削弱联苯固定相的 π-π 相互作用，因此本方法选择 0.1% 甲酸甲醇溶液作为流动相 B。完整方法和色谱图分别见表 I、表 II 和图 3，总运行时间为 6 分钟。

该方法成功实现了 8 种尼秦类化合物（含 1 对异构体）的完全分离。虽检出尿液基质干扰峰，但其与所有目标分析物均实现良好分离，完全适用于含尼秦类化合物的毒理学及药物化学检测需求。

表 I：尼秦类化合物 LC-MS/MS 分析方法参数

分析柱	Raptor Biphenyl 50 x 2.1 mm, 2.7 μm (货号 9309A52)
保护柱	Raptor Biphenyl EXP 保护柱芯 5 x 2.1 mm, 2.7 μm (货号 9309A0252)
进样量	10 µL
柱温	40 ℃
溶剂	含 0.1% 甲酸的水溶液（流动相 A）
流动相 A	水（0.1%甲酸）
流动相 B	甲醇（0.1%甲酸）
流速	1.0 mL/min

梯度：	时间 (min)	%A	%B
	0.00	72	28
	3.50	50	50
	4.25	0	100
	5.00	0	100
	5.50	72	28
	6.00	72	28

表 II：尼秦类化合物多反应监测离子对参数

峰	离子化方式	母离子	子离子1	子离子2
4''-hydroxy Nitazene	ESI+	369.1	100.2	72.3
iso-Butonitazene		425.2	100.3	72.2
Isotonitazene		411.0	100.2	72.2
N-Desethyl isotonitazene		383.0	72.3	312.2
N-Pyrrolidino etonitazene		395.0	98.3	56.1
N-Pyrrolidino metonitazene		381.0	98.2	121.2
N-Pyrrolidino protonitazene		409.0	98.3	56.2
Protonitazene		411.0	100.2	72.2

图 3：尿液基质中尼秦类药物的真实谱图

使用 Pro EZLC 色谱模拟器

简化 NPS 方法开发

方法开发往往耗时耗力，加之新型精神活性物质（NPS）检测的紧迫性和化合物不确定性，使得方法开发工作尤为艰巨。Pro EZLC 液相色谱模拟器中所包含的“滥用药物”数据库涵盖最新 NPS 清单，可在无需实验的情况下完成液相方法的开发和优化。该软件支持对比固定相类型、色谱柱规格、流动相组成等影响分离效果的关键参数来进行方法优化。

为验证预测值与实测值的吻合度，本研究对已建立的尼秦类化合物分析方法进行模拟，并将实测保留时间与预测值进行比对。软件生成的色谱图及预测保留时间如下所示（图 4 和表 III）。

图 4：Pro EZLC 生成的尼秦类化合物模拟色谱图

表 III：

Pro EZLC 软件预测保留时间和实测保留时间对比

峰号	化合物	预测 tR (min)	实测 tR (min)	差值 (sec)	%差值
1	4''-hydroxy Nitazene	0.90	0.94	2.4	4.44%
2	N-Pyrrolidino metonitazene	2.14	2.03	6.6	5.14%
3	N-Pyrrolidino etonitazene	2.18	2.69	7.2	4.27%
4	N-Desethyl isotonitazene	3.09	2.94	9.0	4.85%
5	Isotonitazene	3.58	3.36	13.2	6.14%
6	N-Pyrrolidino protonitazene	3.70	3.53	10.2	4.59%
7	Protonitazene	3.92	3.67	15.0	6.37%
8	iso-Butonitazene	4.23	4.12	6.6	2.60%

对比结果显示，Pro EZLC 生成的色谱图与实验数据高度吻合。所有分析物的保留时间差均在 15 秒以内，差值百分比均值为 4.80%。模拟结果与仪器实测的洗脱顺序和分离度（包括异构体分离）保持一致。Pro EZLC 色谱模拟器是加速和简化新型精神活性物质（NPS）方法开发的有效工具。

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文献参考：

1. Drug Enforcement Administration, Drug & Chemical Evaluation Section, Benzimidazole-opioids, (November 2022) https://www.deadiversion.usdoj.gov/drug_chem_info/benzimidazole-opioids.pdf

2. S. Walton, et al., A forward-thinking approach to addressing the new synthetic opioid 2-benzylbenzimidazole nitazene analogs by liquid chromatography–tandem quadrupole mass spectrometry (LC–QQQ-MS), J. Toxicol. 46 (3), Oxford UP (2021) 221–31. https://doi.org/10.1093/jat/bkab117.