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RT-PCR实验技术对外服务
逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
RT-PCR步骤1、RNA提取并除去RNA中的基因组DNA污染2、第一链cDNA的合成3、用目的基因的上下游引物进行PCR反应4、琼脂糖上进行凝胶电泳5、成像分析软件Quantity One进行半定量
PCR条件的优化:PCR条件的优化主要是①引物退火温度的调节,一般在引物设计软件推荐温度的上下2 ℃变化寻找最佳退火温度。②此外Mg2+浓度的调节也非常重要,通常最佳浓度为2mM左右。③引物和模板的量等。 实验要求
请您提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的总RNA或DNA(大于5ug/样本)。如是如织:100-200mg
请通过EMAIL提供已知的全长基因序列。Email:huameixinan@163.com
请提供详细背景资料:DNA/RNA来源,丰度。
在实验前请您要确保目的基因可以表达,并确保您提供的实验信息的准确性。
服务承诺:1.本公司会在最短的时间内快速将实验完成。
2.本公司保证检测结果准确、客观、可信。3. 本公司保证不对外公开或不向第三方提供客户相关信息。
结果提供:
实验详细步骤,和相关数据。
完整的实验报告实验图片(含软件分析结果)
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