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DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧***转变为5-甲基胞嘧***(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧***是唯一存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是zei主要的甲基化位点,它在基因组中呈不均匀分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域,在哺乳动物中mC约占C总量的2-7%。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。 我们利用重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧***脱氨基转变成尿嘧***,而在适当的实验条件下甲基化的胞嘧***保持不变,再进行PCR扩增,甲基化的位点可以被当作一个C/T的SNP来处理;可利用直接测序法来判断是否CpG位点发生甲基化。 (1)您需要提供 待分析的基因组区域信息;用于提取基因组DNA的组织材料。 (2)我们提供 特异性位点的DNA甲基化的检测结果。
实验原理
单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)是指基因组上单个核苷酸的变异,人类基因组平均每1000个就有一个SNP。它是由基因组DNA某一特定核苷酸位置上单个碱基的转换、颠换、插入或缺失引起的点突变,使得群体之间和个体之间产生了差异。其中转换和颠换发生频率较高,转换是指同型碱基之间的转换,即嘌呤与嘌呤、嘧***与嘧***间;颠换是指发生在嘌呤与嘧***之间的替换。事实上转换的发生频率占多数,且CG序列上出现的SNPzei为频繁,而且多是C转换为T,原因是CG中的C常因为甲基化自发地脱氨基后即成为胸腺嘧***。
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