细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，BioReagent, 用于蛋白分析, for western blot, 哺乳动物样品抽提用

中文名：细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

英文名：Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit

纯度：BioReagent, 用于蛋白分析, for western blot, 哺乳动物样品抽提用

货号：N778382

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

    细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 (Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit) 提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白与浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的核蛋白与浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白为非变性、有活性的，可以用于Western、EMSA、footprinting、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。 

  本试剂盒的抽提原理是，通过CER A和CER B在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀后破坏细胞膜，释放出浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的NER抽提得到核蛋白。

  对于细胞样品，本试剂盒可以抽提50个，数量为2×10⁶个Hela细胞（约40mg）的样品； 对于组织样品，如果每个样品的重量不超过30mg，本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品约为30-60mg，本试剂盒大约可以抽提37个样品。可根据需要按比例放大或缩小提取规模。    

组分表

使用说明：

准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适量的 CER A和NER备用，分别在需要加入前数分钟内加入PMSF至终浓度为1mM。如果目标蛋白含丰富的半胱氨酸，可在CER A、NER中加入DTT至终浓度0.5mM。 

1、对于贴壁细胞：用 PBS 洗一遍，用细胞刮刀刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打细胞（尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白）。500g离心2-3分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。接步骤4。

2、对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500g离心2-3分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。接步骤4。

3、对于新鲜组织：

方法1：把组织尽可能切成非常细小的碎片。在 PBS 里面匀浆制成细胞悬液，500g 离心 2-3 分钟，弃上清，估计细胞沉淀体积，接步骤4。

方法2：把组织称重后，把组织尽可能切成非常细小的碎片，按照每50mg组织加入500μl 的比例加入 CER A，匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，接步骤 5。(在步骤 7 按照每 200μl CER A加10μl比例加入CER B。) 

4、每20μl细胞沉淀加入200μl添加了PMSF的CER A。(对于2×10⁶个Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20μl或40mg。)

5、最高速剧烈 Vortex 5 秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长Vortex时间。) 

6、冰浴10-15分钟。

7、加入CER B 10μl。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。

8、最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 14,000-16,000g离心5分钟。

9、立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。(千万不要触及沉淀，可在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。) 

10、对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50μl添加了PMSF的NER。(不吸尽上清会污染有细胞浆蛋白。) 

11、最高速剧烈 Vortex 15-30 秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔 1-2 分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。 

12、4℃ 14,000-16,000g离心10分钟。 

13、立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。 

注意事项

1、需自备PMSF，PMSF一定要在抽提试剂加入到样品前 2-3 分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。 

2、抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。所用试剂都需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。 

3、对于组织样品，本试剂盒仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果较差。可以抽提的组织样品数通常不足50个。

4、使用本试剂盒抽提得到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白都可以直接用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 

5、为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

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