脂质体转染试剂，BioReagent, 适用于分子生物学, 无菌

中文名：脂质体转染试剂

英文名：Liposomal Transfection Reagent

纯度：BioReagent, 适用于分子生物学, 无菌

货号：L1194252

存储温度：2-8°C储存,禁止冷冻

产品介绍：

该产品是一种多用途的脂质体转染试剂，用于向几乎所有常见细胞系和多种难以转染的细胞系中进行 DNA、siRNA 和 mRNA 的转染。并支持快速转染程序，可以缩短您的转染时间，适配高通量、自动化筛选。

储存方式

2-8ºC 保存，不可冷冻。

使用说明

操作前注意事项

1. 为降低细胞毒性，细胞铺板时需要更换不含抗生素的培养基。对于质粒 DNA 转染，细胞密度需达到 70-90%，有些细胞在密度偏低时容易出现细胞毒性；

2. 制备核酸稀释液和转染试剂稀释液时应使用减血清的培养基或不含血清和抗生素的培养液，因为血清会影响核酸与转染试剂复合物的形成；

3. 一般情况下，转染后无需更换培养基。然而，有些细胞对转染试剂比较敏感，如果在转染后状态不佳，可在 4-6小时后对细胞进行换液，转染效率无明显影响；

4. 首次使用该试剂或者更换细胞类型，特别是对转染试剂敏感的细胞，需要进行预实验，使用不同剂量的转染试剂进行实验，以便摸索出最适转染试剂用量。DNA 的转染量可以在 DNA：脂质体转染试剂（µg/µL）=1:1-1:5 之间摸索。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套；

6. 本产品仅用于科研。

所需物料

1. 质粒 DNA

2. 减血清培养基

3. 离心管、细胞培养板/平皿

操作时间

1. 细胞准备：10 mins

2. 转染复合物制备：30 mins

3. 转染：1-3 days

一、DNA 转染

(以 24 孔板转染 DNA 为例的操作步骤）

Day 1： 在 500 μL 不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到 70-90%。

Day 2：

1. DNA 稀释液制备: 取 1 个干净的 1.5 mL 离心管，向 25 µL 减血清培养基中加入 0.5 µg DNA 后轻柔混匀，得到 DNA 稀释液；

2. 转染试剂稀释液制备: 另取 1 个干净的 1.5 mL 离心管， 向 25 µL j减血清培养基中加入 1 µL 脂质体转染试剂，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置 5 分钟；

3. DNA-脂质体复合物制备: 将 DNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 10 分钟，形成 DNA-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；

4. 将 DNA-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进行培养，为保证足够的营养，建议 4-6 小时后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要 24~48 h。

优化 DNA 转染：为获得较高的转染效率和较低的细胞毒性，通过改变细胞密度以及 DNA 和 脂质体转染试剂浓度来优化转染条件。确保细胞汇合度大于 90%，并在 1:0.5 至 1:5 的范围内改变 DNA (μg) : 脂质体转染试剂 (μL)比。

二、siRNA 转染

(以 24 孔板转染 siRNA 为例的操作步骤)

Day 1：: 在 500 μL 不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到 30-50%。注：在更低密度时进行转染可以让转染和检测之间的时间间隔更长，并且使因细胞过量生长造成的细胞活力损失更小。

Day 2：

1. 将 siRNA 的储液用 DEPC 水稀释到 20 μM；

2. siRNA 稀释液制备: 取 1 个干净的 1.5 mL 离心管，向 25 µL减血清培养基中加入 1 µL siRNA（20μM）后轻柔混匀，得到 siRNA 稀释液；

3. 转染试剂稀释液制备: 另取 1 个干净的 1.5 mL 离心管，向 25 µL减血清培养基中加入 1 µL 脂质体转染试剂，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置 5 分钟。

4. siRNA-脂质体复合物制备: 将 siRNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 10 分钟，形成 siRNA-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；

5. 将 siRNA-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进行培养，为保证足够的营养，建议 4-6 小时后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要 48~96 h。

优化 siRNA 转染：为获得较高的转染效率和较低的非特异性效应，通过改变 siRNA 和 脂质体转染试剂 浓度来优化转染条件。对于 24 孔板，在 10-50 pmol siRNA 和 0.5-1.5 µL 脂质体转染试剂 范围内优化转染条件。根据靶基因和靶细胞的性质，在优化条件时也可考虑以更高密度转染细胞。

三、mRNA 转染

(以 24 孔板转染 mRNA 为例的操作步骤)

Day 1： 在 500 μL 不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到 70-90%。

Day 2：1. mRNA 稀释液制备: 取 1 个干净的 1.5m L 离心管，向 25 µL减血清培养基中加入 0.8 µg mRNA 后轻柔混匀，得到 mRNA 稀释液；

2. 转染试剂稀释液制备: 另取 1 个干净的 1.5 mL 离心管，向 25 µL减血清培养基中加入 1.6 µL 脂质体转染试剂，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置 5 分钟；

3. mRNA-脂质体复合物制备: 将 mRNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 10 分钟，形成 mRNA-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；

4. 将 mRNA-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中

进行培养，为保证足够的营养，建议 4-6 小时后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要 24~48 h。

优化 mRNA 转染：为获得较高的转染效率和较低的细胞毒性，通过改变细胞密度以及 mRNA 和 脂质体转染试剂浓度来优化转染条件。确保细胞汇合度大于 90%，并在 1:0.5 至 1:5 的范围内改变 mRNA (μg) : 脂质体转染试剂(μL)比。

扩大或缩小转染规模

在不同规格培养容器中转染细胞，按表中所示根据相对表面积按比例改变 脂质体转染试剂、核酸、细胞和培养基的用量。对于自动化、高通量系统，在 96 孔板中进行转染时，建议采用 10 µL 的稀释体积。

四、DNA、siRNA / shRNA 质粒共转染

(以 24 孔板共转染 DNA 、siRNA 为例的操作步骤)

Day 1： 在 500 μL 不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到 70-90%。

Day 2：

1. 建议将 siRNA 的储液用 DEPC 水稀释到 2 μM（视情况而定）；

2. 核酸稀释液制备: 取 1 个干净的 1.5 mL 离心管，向 25 µL减血清培养基中加入 100 ng 质粒 DNA 和 2.5 µL

siRNA（2 μM）后轻柔混匀，得到核酸稀释液；

3. 转染试剂稀释液制备: 另取 1 个干净的 1.5 mL 离心管， 向 25 µL减血清培养基中加入 1 µL NanoTrans™

Transfection Reagent plus，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置 5 分钟。

4. 核酸-脂质体复合物制备: 将核酸稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 10 分钟，形成核酸-脂质体

复合物（溶液可能变得浑浊）；

5. 将核酸-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进

行培养，为保证足够的营养，建议 4-6 小时后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要 24~48 h 。

建议的试剂用量和体积：

五、快速转染程序（反向转染）

对于高通量、自动化筛选等一些实验场景，我们推荐使用快速转染程序。您可以通过将细胞直接铺板到转染混合物中，

进行快速 96 孔板转染。在平板中制备复合物，并向 100 μL 体积中直接添加密度为基础方案中规定的细胞密度的两

倍的细胞。在存在复合物的情况下，细胞将照常贴壁。

注：对于更大规模的转染，也可尝试快速转染程序，以缩短实验周期。

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