Transwell 细胞迁移实验

                                                             Transwell 细胞迁移实验
实验步骤：
1. 将transwell小室反面朝上，架在24孔板上，每个transwell小室底面“涂”10μl 纤维连接蛋白（0.5mg/ml），在超净台内风干（大约1小时），使纤维连接蛋白固化于膜底面。将transwell小室放回24孔板孔内。
2. 消化细胞并计数，取105个细胞置于1.5mlEP管中，2000rpm离心5分钟，去上清，加入200μl无血清培养基重悬细胞，加入transwell小室中。下层小室加入10%FBS的RPMI1640培养基。放入37℃孵箱中培养5个小时。
3. 染色：
①取出insert, 用棉签擦除里面的细胞，并用PBS（用600微升放在另一个孔中）轻轻洗掉insert里面剩余细胞，然后取出insert放纸上把多余的水吸净。
②取出transwell小室，用棉签擦除里面的细胞，并用PBS轻轻洗掉里面剩余细胞。用甲醇、冰醋酸按照3：1配制成混合液，固定transwell小室反面的细胞10分钟。
用结晶紫染色剂染色并固定15分钟。
③自来水轻轻涮洗insert,3－5次即可。（如果正面能看见颜色，就用棉签檫一下檫干净。）
④用滤纸吸干insert里残留的水，放在通风橱中风干1分钟。
⑤手术刀片，小心沿小室边缘将膜剔下，反面朝上放在载玻片上。
立即滴二甲苯约15µl于膜上，倾斜载玻片，用滤纸吸走多余的二甲苯。滴中性树胶约15µl于膜上，加盖玻片，排除气泡。
4. 显微镜下将每张膜随机取5个视野进行拍照，随后观察计数，平均值即为该膜一个视野所通过膜的细胞数平均值。
5. 赛尔生物细胞Transwell 迁移实例：

          
 
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