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免疫共沉淀(Co-Immunoperecipation)是基于抗体和抗原之间结合的专一性用于研究蛋白质相互作用的经典方法。原理简介:细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在许多蛋白与蛋白质之间的相互作用体被保留下来,利用兴趣蛋白单一结合性抗体免疫沉淀该蛋白,与兴趣蛋白结合的其它蛋白也可以同时被沉淀下来,沉淀得到的蛋白复合体能够通过变性凝胶电泳分离开来,以此分离相互作用蛋白或者定性分析几种相互作用蛋白之间的作用力大小。服务案例SV40大T抗原和P53蛋白相互作用的免疫共沉淀流程简介:将大T抗原表达载体和myc tagged-P53表达载体共转染进入细胞柱表达后,提取总蛋白,加入抗myc抗体充分反应,用Protein A agarose捕获抗原抗体结合物,洗脱后蛋白上清同时用抗大T抗原抗体和抗myc抗体Western Blot检测。可根据Western Blot光密度结果定量分析不同表达体中大T抗原和P53蛋白相互作用力大小。
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