CRISPR/Cas9 基因敲除细胞株（单克隆，鉴定）(辉园苑)

       CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上，sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合，Cas9切割靶标序列产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复，通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接（NHEJ：nonhomologous DNA end joining）的方式对断裂的双链进行修复，从而造成靶位点基因的插入或缺失突变，发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。

CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破，具有操作简便，周期短，敲除效率高，作用靶点多，无基因、细胞及物种限制，目的基因的大小不受限制，不受转录本数量影响等优势，逐渐成为基因敲除的标准操作工具。

 

1、针对敲除目的基因设计合适的靶点，构建3个CRISPR/Cas9敲除质粒并测序验证。
2、分别将3个CRISPR/Cas9敲除质粒转染293T细胞，利用T7EⅠ试验筛选出编辑效率最高的CRISPR/Cas9敲除质粒。
3、用编辑效率最高的CRISPR/Cas9敲除质粒包装慢病毒，并且检测慢病毒的滴度。
4、用慢病毒感染目的细胞，抗性筛选获得CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞株。
5、CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞株测序检测。

 

1、待敲除目的基因的名称和编号(gene ID)。
2、需构建敲除株的细胞信息。

1. CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞。
2. CRISPR/Cas9敲除质粒。

3. CRISPR/Cas9敲除质粒的序列，酶切鉴定、测序结果。

4. T7EⅠ试验检测结果。

5. CRISPR/Cas9敲除单克隆细胞株测序检测结果。

6. 说明实验过程中所用的耗材、仪器设备和操作过程的实验报告一份。
 

服务周期：3-4个月。

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