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一、 实验原理:Southern blotting是对基因组DNA特定序列进行检测的常用方法,首先提取基因组并利用限制性内切酶消化DNA,在琼脂糖凝胶进行电泳分离,将DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出DNA分子的限制图谱。二、实验步骤:1.探针的制备PCR获取检测探针,标记。2.核酸样品的制备动植物组织或细胞抽提出基因组DNA,并使用限制性内切酶将其切断成不同大小的片段。3.琼脂糖凝胶电泳分离酶切DNA样品电泳是将DNA样品按片断长短进行分离,然后进行杂交,这样可确定杂交靶分子的大小。4.转膜与固定将凝胶中变性的单链DNA通过虹吸法转移到相应的固相载体上,使用高温烘烤的方法使DNA片段固定于膜上。5.杂交与显影转印后的滤膜经过预杂交一段时间后,加入标记的探针DNA进行杂交反应。杂交完成后使用酶底物对与标记探针结合的酶联抗体进行显色,烘干拍照。三、准备材料实验样品:用于抽提核酸和探针制备的材料:动植物组织;探针序列信息;实验数据和参考文献:这将会帮助我们更好地理解您的实验背景,有利于实验的顺利进行。 四、实验结果实验结果:酶切检测跑胶图片,southern杂交后的结果图片;实验产物:探针引物及扩增产物、杂交膜。
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