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Hi- Primers介绍 精准医学时代,靶向特异区段重测序的需求日益增加,样本量常达上千个,只用传统的Sanger法或目标区域杂交捕获测序价格昂贵。因此基于超高重PCR的扩增子捕获测序应对该区段范围适用性强,针对连续区段,外显子靶标以及客户指定位点,特异设计优化捕获引物,多重PCR一次捕获所有位点,提供预混引物以及反应试剂,方便客户自行实验。 上海翼和生物超高重PCR建库技术,利用自主开发的多重PCR引物设计软件,结合知识密集型的多重PCR优化技术,克服扩增效率不均一问题,保证每个扩增子间拷贝数的均一性(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性)。 使用超高重PCR建库试剂盒Hi- Primers,在建库过程中引物端自动加上区分样本barcode,无需二次建库,两轮PCR完成整个建库过程。试剂盒内容包含:靶向捕获特异性引物Mix,测序平台定制接头,纯化试剂,扩增反应体系等。只需拥有自己的测序平台,Hi- Primers帮您完成建库所有问题。应用领域:孟德尔遗传性疾病的筛查和诊断,精准医疗研究与应用等。试剂盒适用测序平台
Hi- Primers建库流程示意图
试剂盒定制流程
引物设计:根据客户需求(对连续区段,外显子靶标以及客户指定位点),基于超高重PCR的扩增子捕获测序,利用上海翼和生物自主开发的引物设计软件,设计特异性捕获引物。引物优化:利用多重PCR引物优化技术,使扩增子间均一性好,保证每个扩增子间拷贝数差异控制在平均深度的5~10倍以内(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性),90%扩增子reads数大于15,不浪费测序通量。试剂盒组成:试剂盒包含包含从扩增到建库到测序前纯化所用到的所有内容,购买一个试剂盒即可完成整个建库过程。 试剂盒内容组成
试剂盒实验流程
靶基因重测序多重PCR捕获建库试剂盒(Hi-Primers),靶基因重测序多重PCR捕获建库试剂盒(Hi-Primers)
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