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RNA干扰(RNA Interference, RNAi)现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将含有靶基因mRNA同源互补序列的RNA(Double strand RNA, dsRNA)导入细胞后,能够特异地识别该mRNA,引起mRNA的降解,从而导致相应的功能缺失。RNAi提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,该技术已被广泛用于研究基因功能和传染性**及恶性肿瘤基因**领域。目前常用的RNA干扰手段为miRNA、 shRNA 和siRNA等。
MiRNA是一类可以通过RNAi机制调节基因表达的内源性小RNA,人工miRNA与shRNA的设计原理基本相同,由于miRNA具有内源性,因此其更易产生有效的基因沉默。
技术流程:
dsRNA或pre-miRNA被导入细胞后,能够被一种特异的核酸内切酶(Dicer)识别并切割成为小片段,这些片段在RNA解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-Induced Silencing Complex,RISC),RISC与mRNA同源区进行特异性结合,若miRNA与mRNA的结合位点配对,则切割mRNA;若miRNA与mRNA的结合位点不配对,则抑制mRNA的翻译。
服务内容:RNA抽提,QC,RNA标记,芯片杂交,数据分析,实验完整报告。
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