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1. 首先将事先配好的指示菌培养基煮融,稍冷却后放到恒温箱中,60℃恒温2-3小时。(因为恒温时间较长,所以第一件事情就是先把培养基放到恒温箱恒温,在恒温的这段时间做别的事情可以节约很多时间。)
2. 把培养基放到恒温箱后开超净工作台的紫外线杀菌20分钟。杀菌的前把经过高压灭菌的牛津杯、镊子、Ep管、培养皿、移液枪等需要用到的工具放进工作台,紫外线可以将表面的菌杀死。
3. 杀菌结束后将微生物发酵液管从摇床培养箱拿到超净工作台,用移液枪将试管中的液体吸到Ep管中,然后放到离心管离心。在离心的时候配置甘油培养基,用来保存菌种。
4. 离心结束后将Ep管和甘油培养基拿到工作台,将Ep管的上清液吸到一个经过杀菌的管中放置备用。吸干净上清液后往Ep管中加入1ml甘油培养基用来保藏菌种(沉淀物),将菌种放到-20℃的冰箱保存。
5. 牛津杯测微生物代谢产物一般要将上清液稀释成5个浓度梯度,即1mg/ml 0.1mg/ml 0.01mg/ml 0.001mg/ml 0.0001mg/ml。这时候指示菌培养基应该恒温到60℃了。
6. 将指示菌培养基拿到工作台上,加入所需的指示菌,摇匀,然后倒平板。倒平板后要马上用镊子将牛津杯竖直插入到培养基上面,静置。带培养基凝固后拔出牛津杯。
7. 用移液枪吸取200微升刚刚稀释好的上清液到牛津杯的孔中,注意不要让上清液占到周围也不要让上清液溢出牛津杯表面。加液前要先将每个孔编号,例如ABCDE,因为加液后不可以将培养皿倒过来。全部上清液弄好之后将培养皿放到恒温箱中培养12小时,观察抑菌情况。如果上清液有抑菌活性,牛津杯周围会形成一个透明圈,用直尺量直径并记录。
牛津杯法测细菌代谢产物抗菌活性的操作步骤 ,牛津杯
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