GPCR信号通路分析

G蛋白偶联受体（GPCR）是一个庞大的细胞表面跨膜受体家族，已经发现800多个成员，参与多种生命活动以及内分泌与代谢等多种生理过程，同时，与糖尿病、心脏病、肿瘤、免疫疾病等重要疾病的发生、发展及治疗密切相关。基于GPCR在生理病理过程的重要生物作用，这个蛋白家族目前已经成为最重要的药物作用靶标库。目前市场上对GPCR的筛选方法众多，包括同位素标记法、荧光标记法、抗体标记法等等。其中β-lactamase检测法在高内涵高通量筛选中得到广泛使用。β-lactamase检测法的原理如图所示，细胞稳定表达含有NFAT反应元件或cAMP反应元件的β-内酰胺酶报道基因（bla）。在没有 β-内酰胺酶活性的条件下，409 nm 激发完整 CCF4 分子，香豆素（蓝色）会使荧光共振能量转移至荧光素（绿色），使荧光素发出 520 nm 的绿色荧光信号。如果存在 β-内酰胺酶活性，CCF4会被切割，使两种染料分开并干扰荧光共振能量转移 (FRET)，此时如果用 409 nm 的光激发香豆素，产生的将是 447 nm 的蓝色荧光信号。这些荧光信号的变化可用荧光显微镜或高内涵高通量系统观察分析。锐博生物利用高内涵高通量筛选系统结合β-lactamase，检测法可以进行GPCR活性分析和相关药物的筛选。

检测特点和优势

活细胞水平的检测；

检测背景低：时间分辨荧光的检测方式，没有荧光染料自身的交叉干扰和来自样品自发荧光的干扰；

实验结果可靠：FRET技术使检测结果反映的是真正的受体聚集，而不是仅仅相互靠近；

不需要抗体：Tag-lite利用最新的SNAP技术，不需要抗体来确定实验的特异性。

应用领域

受体二聚化/寡聚化分析；

孤儿受体的研究。

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