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MALDI-TOF/TOF蛋白质鉴定
技术原理
MALDI-TOF/TOF,即基质辅助激光解析电离飞行时间质谱,是将样品均匀包埋在基质中,基质吸收激光提供的能量而蒸发,携带样品分子进入气相,并将一部分能量传递给样品分子使其离子化。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测,即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比,从而检测离子。适用于二维电泳或DIGE胶点样本或者较纯的蛋白样品的鉴定。
样本要求
样本类型
双向凝胶电泳点
考染、银染(质谱兼容)点清晰可见
SDS-PAGE条带
单一蛋白质,纯度>90%,考染、银染(质谱兼容)清晰可见
蛋白质溶液
单一蛋白质,纯度>90%,蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl;
缓冲液不含去污剂NP40、Triton X-100等
检测仪器
4800 Plus MALDI TOF/TOF™(ABI)
二、HPLC-MS/MS蛋白质鉴定
HPLC-MS/MS,又叫高效液相色谱-质谱联用技术,通过液相色谱分离,串联质谱检测,zei后用相应的数据库进行检索匹配。适用于二维电泳胶点、SDS-PAGE胶条、IP/Co-IP/pull-down产物以及shotgun混合蛋白质样品的蛋白鉴定。
考染、银染(质谱兼容)条带清晰可见
蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl;缓冲液不含去污剂NP40、Triton X-100等
Thermo Scientific LTQ
Thermo Scientific Q Exactive
实验流
代表性文献
1. Wang X, et al. A comprehensive differential proteomic study of nitrate deprivation in Arabidopsis reveals complex regulatory networks of plant nitrogen responses. J Proteome Res, 2012; 11(4): 2301-2315.
2. Tamura K, et al. Identification and characterization of nuclear pore complex components in Arabidopsis thaliana. Plant Cell, 2010; 22(12): 4084-4097.
蛋白质定性鉴定,
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