蛋白质相互作用- 酵母双杂交技术服务

1   酵母双杂交筛库 

采用低假阳性的酵母双杂交方法，进行特定的文库筛选（肝脏、脑、脾脏等）鉴定研究目的蛋白的相互作用分子。包括文库扩增、自激活验证、文库筛选、酵母回转实验。

2   载体构建   

（1）构建带有GST与His标签的原核表达质粒，可用于抗原制备、体外蛋白相互作用等需要原核表达蛋白的实验。

（2）构建带有Myc、His、Flag、HA、GFP、RFP等标签的真核表达载体，用于瞬时转染或稳定株的筛选、哺乳动物细胞内的表达及细胞内定位研究。

3   免疫共沉淀（Co-IP）

可代为开展细胞内的蛋白质－蛋白质相互作用研究。包括表达验证。

4   GST/His-pull down  

可代为开展体外的蛋白质－蛋白质相互作用研究。

5   转录因子活性的检测 

可通过报告基因实验检测雌***受体、p53、AP-1、NF-ΚB等转录因子的活性。

6   表面等离子体共振（SPR）

蛋白相互作用检测方法之一。主要用于检测蛋白与蛋白、蛋白与DNA、抗原与抗体、蛋白与配体或小分子化合物的动力学常数（结合常数、解离常数、平衡常数等）。

7   蛋白的表达与纯化   

原核上清表达蛋白；提供量：1-2 mg。

8   稳定株的筛选   

可提供两株以上目的基因稳定表达或敲低的细胞系，同时提供对照细胞系。

9   RNAi序列的设计及鉴定   

可根据需要设计目的基因的RNAi序列，构建目的基因的RNAi载体或提供相关的siRNA序列，并对RNAi序列的有效性进行检测，给出有效的RNAi序列。RNAi载体可用于将其稳定整合于细胞基因组，得到目的基因敲低的细胞系。

单位：北京蛋白质组研究中心

地址：北京市昌平区生命科学园路33号

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