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蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础,研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验,同以往研究蛋白质-蛋白质之间相互作用的实验手段相比,酵母双杂交系统具有其独特优势。1、融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行,蛋白质保持天然的折叠状态,这是其他离体生化检验方法所缺乏的,它所证实的蛋白质间相互作用将更接近于体内的真实水平。2、 双杂交系统的敏感度非常高,蛋白质之间结合常数低至1mmol/L时都可以被侦测。3、 在筛选cDNA 文库时,双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列,它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白,省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。酵母双杂交实验原理以Gal4 系统为例,BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时,DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合,转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下,单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列(GAL UAS)结合但不能引起转录,单独的AD 则不能与GAL UAS 结合;只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时,BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录,从而激活下游报告基因,通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。酵母单/双杂交检测服务项目列表
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