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细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。服务内容:1、细胞培养。 2、Transwell检测。服务流程:细胞迁移1 制备细胞悬液 消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,用PBS洗1-2遍,用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×104/ml。2 接种细胞① 6孔板下室加入1ml含FBS的培养基。② 取细胞悬液2ml加入Transwell小室。③ 培养细胞:培养至设定时间,取出下室基底膜。3 结果统计用棉签擦去基质胶和上室内的细胞用95%酒精固定15-20min。苏木素染色细胞核10分钟。细胞计数:于倒置显微镜观察照相(放大倍400倍)。细胞侵袭:1 Transwell小室制备包被基底膜:用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面,4℃风干。水化基底膜在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9ug/ul) 60-80μl (注意体积不可太大,以刚把聚碳酸酯膜浸湿为zei好),置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝胶。2 制备细胞悬液 消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,用PBS洗1-2遍,用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×104/ml。3 接种细胞 6孔板下室加入1ml含FBS的培养基。 上室加入细胞悬液 培养至设定时间,取出下室基底膜。4 结果统计用棉签擦去基质胶和上室内的细胞用95%酒精固定15-20min。苏木素染色10分钟。细胞计数:于倒置显微镜观察照相(放大倍数400)客户需要提供的信息:
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