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iTRAQ技术原理:
同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术是近年来zei新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术,具有较好的定量效果、较高的重复性,并可对多达四种不同样本同时进行定量分析。
iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。 在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114~117)的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。 ► 可同时对4个样品进行蛋白差异分析,节省样品的用量和检测的时间;► 二级碎片离子信号增强,产生质量更高的二级质谱,确保鉴定结果高的可信度;► 可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测;► 可分析详细分期型的临床疾病标本,并可设计样本重复,甚至可以进行个体样本的研究。
iTRAQ试剂结构: iTRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质,包括三部分: 一端是报告部分 reporter group 另一端是肽反应部分 peptide reactive group 中间部分是平衡部分 balance group其中: reporter group:质量为114Da、115 Da、116 Da、117 Da,因此iTRAQ试剂共四种。• peptide reactive group:将reporter group与肽N端及赖氨酸侧链连接,几乎可以标记样本中所有蛋白质。• balance group:质量为31 Da、30 Da、29 Da、28 Da,使得四种iTRAQ试剂分子量均为145 Da,保证iTRAQ标记的同一肽段m/z相同。
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