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全基因组扩增背景
全基因组扩增方法是一种增加有限的DNA样本的数量的方法。在法医和基因疾病等研究中,DNA样本的量非常有限,但是又要进行多重分析应用,因此全基因组扩增技术将发挥有效的作用。
上海翼和生物采用多重置换扩增(MDA)技术,在恒温条件下,对样本全基因组DNA进行高产量和高质量的均匀扩增。上海翼和AmpGeno全基因组扩增技术,可连续合成多达70kb的DNA片段,保证高度复制准确性。
基本原理
全基因组扩增主要依赖于Phi29 DNA聚合酶,由于Phi29聚合酶不从基因组DNA模板上解离,使得生成的DNA片段能延长到数十甚至百kb,这个酶具有3’–5’的核酸外切酶校读功能,其错误率比基于Taq DNA聚合酶的方法低百倍。除了具有高保真性,还具有特殊的链置换和连续合成特性。
Phi29 DNA聚合酶消除了DNA的二级结构,因而能够准确并且均匀的扩增基因组序列。使用高度续进性的Phi29 DNA聚合酶得到的长DNA片段,确保了Phi29扩增得到的DNA覆盖了整个基因组,连贯并且无偏地扩增所有遗传位点。
样本要求
全基因组扩增要求模板DNA不能严重降解,而且每个反应的模板DNA用量至少5ng,以减少因模板量太少而造成等位基因的不平衡扩增。正常情况下,50 µl的反应体系,5ng模板DNA的扩增产物,可稀释后用于后续的DNA分析。
应用实例:
图1.人类基因组全扩电泳结果
图2. HEK293细胞基因组DNA全扩电泳结果
全基因组扩增DNA产物适用于:
二代测序
使用芯片进行基因分型检测
比较基因组杂交研究(CGH)
单核苷酸多态性(SNP)基因分型检测
Sanger测序
STR微卫星分析
单体基因分型检测
AmpGeno全基因组扩增服务,
AmpGeno全基因组扩增服务信息由上海翼和应用生物技术有限公司为您提供,如您想了解更多关于AmpGeno全基因组扩增服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
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