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siRNA质粒载体构建技术服务
RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术,即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段(19-23bp)外源双链 RNA(double s`tranded RNA)导入细胞中,通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解,从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。
基本原理示意图
siRNA构建技术服务
本公司提供siRNA 载体的构建服务,siRNA载体可以在细胞内直接转录出 shRNA ,其干扰效果等同于siRNA ,而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所属物种,本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列,在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。
闪晶生物siRNA载体构建服务程序: 1. siRNA表达载体的选用: 本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记,可以建立稳定表达系,同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因,可以无限扩增。 2. 设计siRNA靶序列 A 、根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19-21nt 长。 B 、对于每条选定的siRNA靶序列,设计siRNA正义链和反义链,以loop(9nt)相连,称为shRNA(short hairpin RNA)。 C、阴性对照的设立. 3. 合成模板: 合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链,退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点,同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点,可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。 4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后,1 %琼脂糖凝胶电泳,回收线性载体。 5. 连接与转化: 把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶,插入片断与载体的摩尔比约为 3 : 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌,在LB Amp培养基上涂板,37 ℃培养过夜。 6. PCR 鉴定 7. 测序鉴定 8.柱抽提阳性克隆载体并定量。
收费标准
个数
价格(¥)
时间
1-3个siRNA表达载体构建
1800.00/个
14个工作日
4-10个siRNA表达载体构建
1500.00/个
20个工作日
10个以上
协商
闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个.
联系电话******nbsp******/span> E-mail: lou800624@163.com 乘车路线:火车站坐1号地铁到终点,然后换乘5号线到北桥站即可。
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Gensynthese Gene SynthesisDNA Synthese Peptide Synthesis 全基因合成 基因合成 密码子优化 多肽合成 细胞培养 细胞转染 细胞稳转 细胞瞬转 免疫印迹 western blot 蛋白质印迹 病毒构建包装 载体构建 蛋白表达 蛋白表达纯化 MGB probe Protein expression Polyclonal Antibody
siRNA质粒载体构建,
siRNA质粒载体构建信息由上海闪晶分子生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于siRNA质粒载体构建报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
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