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细胞增殖实验
摘要:在293T细胞中过表达human Oct-4基因, 通过CCK-8方法对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组的细胞增殖进行定量,研究Oct-4基因对293T细胞增殖能力的影响。实验结果显示Oct-4基因的表达促进293T细胞的增殖能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。 关键词:Oct-4,CCK¬¬-8,细胞增殖,293T
一、 实验原理 细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,zei终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK-8等方法。
二、 实验目的 用质粒Oct-4-EGFP转染后的细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析,考察Oct-4基因对细胞的增殖能力产生的影响。采用CCK-8 法对3组细胞进行比较分析。
三、 实验步骤 实验共分以下5个主要步骤: 1. 收集细胞: 收集细胞:将293T细胞消化后制成单细胞悬液,计数后,每组细胞配成一定浓度的单细胞悬液。 2. 细胞铺板: 细胞配成2×104cell/ml后,每孔铺100μl细胞,即2000cell/well。一般每个样品设5~6个复孔,边缘孔加100μl无菌水或者PBS。37℃,5%CO2培养箱中培养。 3. 质粒转染: 16h后,按照转染试剂说明书转染细胞(0.2μg质粒,0.5μl和元生物转染试剂)。 4. 细胞培养6、24、48、72h后CCK-8处理,酶标仪检测: 转染后, 在每个检测时间点加入10μl的CCK-8于孔中,无需换液。3h后,酶标仪检测450nm OD值。 5. 统计分析: GraphPad Prism(Ver5,GraphPad Software) 作图,并进行双侧t检验。
四、 实验结果 表1. 293T过表达Oct-4基因CCK-8检测数据(平均值,每组五次重复)
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