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构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。zei常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,因此,慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。
吉满生物制备的带puromycin抗性的慢病毒,在感染目的细胞后,可通过加入puromycin进行选择性筛选,从而获得稳定表达shRNA或者特定基因的细胞株。
服务优势
生产流程
服务流程
实验服务报告内容
1. 本公司构建载体的,提供载体及带有载体的菌液各一份及相关的序列信息;
2. 构建成功的稳定细胞株,转染后需要检测的,参考相关实验服务;
3. 构建稳定细胞株实验所需试剂耗材、仪器设备信息、实验方法各一份;
4. 其他与构建稳定细胞株技术服务相关的信息。
稳定细胞株构建,
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