一份牛奶中的地塞米松残留量的测定方案送给您！

实验背景

       合成的皮质类固醇，简称为DEX，其具有抗炎及抗过敏的效果，其能抑制结缔组织的增生，降低毛细血管和细胞膜的通透性，减少炎性渗出，抑制组织胺和其他毒性物质的形成与释放，能促进蛋白质转变成糖，减少糖的利用；其主要应用于各种炎症、严重感冒、传染病、过敏性疾病、风湿、休克、代谢疾病及引产，但是长期使用，容易导致水肿、低血钾、肌萎缩、骨质酥松、脱钙、病理性骨折、糖尿、幼畜生产停滞等。因此各国严格禁止地塞米松作为生长激素使用，同时限制此药物用于动物源性食品中，我国及欧盟规定牛奶中的地塞米松的最大残留限量为0.3ug/kg，日本肯定列表中的牛奶中的残留限量为0.02mg/kg。   安谱实验一直密切关注动物源性食品安全，为食品安全保驾护航，本次安谱实验参考国标GB/T22978-2008《牛奶和奶粉中地塞米松残留量的测定-液相色谱串联质谱法》，在10ppb加标水平上，回收率在90%以上，重现性好，满足国标检测要求。

接下来，小编带大家走进安谱实验室一起来学习具体检测方案吧~

一、牛奶样品处理

样品提取：

取10g样品（精确到0.01g）置于离心管中，（加标浓度：500ppb，100uL，使得上机检测浓度为10ppb），加入20ml乙腈，涡旋混匀1min,以5000r/min离心10min。取上清液至梨形瓶中，旋转（水浴45℃）减压蒸发，至体积小于5ml.待上样。

小柱操作：

SBEQ-CA0853  CNWBOND HC-C18 SPE 小柱  500mg，3mL/50PCS

• 活化：3mL乙腈

• 平衡：3mL水

• 上样;  全部待上样液

• 淋洗：用5mL水洗涤容器瓶后上小柱淋洗,淋洗完抽干小柱

• 洗脱：5mL乙腈

• 浓缩：洗脱液45℃水浴氮吹干，5mL流动相复溶后，过膜上机测试

二、仪器条件

01液相条件

                                                                                                 

色谱柱：Athena C18（2.1*100mm，1.8um）梯度设置：

time（min）	A: 0.1%甲酸水	B: 乙腈
0	95	5
5	5	95
5.1	95	5
9	95	5

流速：0.2mL/min

柱温：40℃

进样量：20ul

02质谱参数

离子源：ESI

扫描方式：正离子模式

检测方式：MRM

电离电压：5000V

离子源温度：300℃

雾化温度：200℃

定性离子对（m/z）393.2/373.2；393.2/355.2

定量离子对（m/z）393.2/373.2

碰撞能：12ev

注：地塞米松在APCI上响应较低，改用ESI；并优化了流动相梯度

三、实验谱图

 图1. 基质标准曲线（5、10、50ppb）

 图2. 牛奶基质空白提取离子色谱图

图3. 溶剂标液（10ppb）提取离子色谱图

图4. 牛奶基质加标（10ppb）提取离子色谱图

四、实验数据

基质	样品名称	地塞米松加标回收率	平均值	RSD
牛奶	样品加标-01	95.40%	92.75%	4.00%
样品加标-02	90.10%

五、实验耗材