系列问答 | 让世界没有牛结核病（上篇）

 牛结核常用检测方法有哪些？

牛结核检测方法有：皮试、BOVIGAM® γ干扰素检测、结核抗体检测、荧光定量PCR检测。

皮试检测：皮试又分为尾根皮试检测（CFT）；颈部单点皮试检测（SICCT）；颈部双点皮试检测（也叫比较变态反应，CCT）

皮试的原理是基于细胞免疫反应，作为检测牛结核的经典方法，已经使用了上百年。该方法是在皮内注射牛结核菌素纯化蛋白衍生物（PPD）并在72小时后测量注射部位肿胀（迟发型超敏反应）。 可以单独使用牛结核菌素进行皮试检测（CFT或SICCT），也可以使用牛结核菌和禽结核菌素进行比较皮试检测（CCT）。 结核菌素试验通常在颈中部进行，但也可以在尾根部褶皱中进行。 颈部皮肤对结核菌素比尾根部皮肤更敏感。 为了弥补这种差异，可以在尾根实验中使用更高剂量的结核菌素。

BOVIGAM® γ干扰素检测：OIE标准方法，可独立使用。

此方法和皮试一样，是一种细胞免疫反应。BOVIGAM®γ干扰素试验是在全血中检测γ干扰素（一种淋巴因子）的释放。即感染了牛结核的动物，使用牛结核菌素刺激血液中的细胞，如果牛感染过结核，则致敏T细胞释放γ-干扰素即IFN-γ（Wood等，1990）。使用夹心ELISA检测所释放的γ-干扰素，判断动物感染状态。BOVIGAM®γ干扰素检测可在牛结核检测中独立使用，在全球众多国家的牛结核防控和净化项目中广泛应用。

牛结核抗体检测：

ELISA抗体检测可以作为基于细胞免疫的检测（皮试和γ干扰素检测）的补充而不能替代细胞免疫的检测。ELISA的一个优点是其简单，但因为在疾病过程中牛的体液免疫应答出现在感染后期，同时其发展不规则，个体体液免疫反应差异大，因此其敏感性受到限制。特别是当使用复合抗原如结核菌素或牛分枝杆菌培养物滤液时，检测的特异性也不理想。

牛结核荧光定量PCR（qPCR）检测：

荧光定量PCR检测，可以检测动物组织器官、血液、牛奶、排泄物、环境等中的细菌和病毒。目前Thermo Fisher的VetMAX

™️结核分枝杆菌复合群qPCR检测试剂盒是唯一的牛结核商品化qPCR试剂盒，能够同时检测导致牛结核病的全部七种结核分枝杆菌菌株，具有高度特异性，可以作为精确的诊断工具，用于疑似病例的确诊和发现感染后期的动物。目前该技术多用于结核病例的确认和科研用途。

用什么来评价检测的准确性？

评估检测方法的标准有很多，例如常见的敏感性和特异性；阳性预测值和阴性预测值；重复性和再现性；批间差和批内差等。

这里和大家分享最常见的评估敏感性和特异性的方法：

检测敏感性（Sensitivity）=（阳性）/（真阳性+假阴性）*100%

检测特异性（Specificity）=（阴性）/（真阴性+假阳性）*100%

三种皮试检测方法的准确性有哪些区别？

例如，CFT检测的敏感性为82%，也就是如果有100头感染牛结核的动物，用该方法能检测到82头（真阳性），而其余18头漏检（假阴性），结果为假阴性。颈部单点皮试的特异性为85%，也就是说，如果一个100头未感染的动物，使用该方法检测，其中85头检测结果是阴性（真阴性），而有15头检测结果是阳性，即“假阳性”。

比较皮试检测是当动物同时感染牛结核和其他结核分枝杆菌的情况下，区分牛结核感染和其他结核分枝杆菌感染。因此，检测特异性最高，但同时检测的敏感性有所下降。

皮试和BOVIGAM®γ干扰素的区别是什么？

皮试和BOVIGAM®γ干扰素都是基于细胞免疫检测。感染过结核的T细胞，再次被结核抗原刺激时，致敏T细胞会产生并释放γ干扰素。所以，就使用牛结核菌素刺激血液中的T细胞，检测其是否释放γ干扰素，来判断动物的感染状态。皮试是一种动物体内刺激的过程，BOVIGAM®γ干扰素是一种采血后，体外刺激的过程。然后分别通过测量皮厚，或者ELISA的方法，衡量是否有γ干扰素的释放，判断动物的感染状态。