如何测定番茄红添加剂中番茄红素含量？

（1）BHT溶液：准确称量2.5g BHT置于500 mL 棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容，浓度为5000 mg/L，密闭避光放置，可稳定储存3个月。

（2）番茄红素对照贮备液：分别称取20 mg 番茄红素对照品和20 mg BHT，精确至0.000 1 g，取少量二氯甲烷溶解后，转移至100 mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容，混合均匀，浓度为200mg/L。由于番茄红素不稳定，番茄红素对照品溶液使用前应采用分光光度法标定其纯度。番茄红素对照品溶液应在-20℃条件下储存，24 h内可使用。

量取1 mL（VA）番茄红素对照品溶液，置于100 mL（VB）棕色容量瓶中，加入5 mL 乙醇和5 mL BHT溶液，用石油醚定容，混匀。将此溶液置于1 cm 比色皿中，以石油醚作空白对照，用紫外-可见光分光光度计在472 nm附近的最大吸收波长处测定吸光度。吸光度应控制在0.3~0.7之间，否则应调整溶液浓度，再重新测定吸光度。番茄红素对照品溶液中番茄红素浓度以CST 计，单位为毫克每升（mg/L）,按公式（1）计算：

                             ……………………………………………2-1

式中：

Amax ——番茄红素对照品溶液在472 nm 附近的最大吸收波长处测得的吸光度值；

D ——稀释因子（VB/VA），注意根据最终的稀释倍数换算，不能完全按照此公式计算

10000 ——浓度换算因子；

3450 —— 番茄红素的吸光系数。

（1）试样溶液的配制

取适量试样用少量二氯甲烷溶解后转移至100 mL 棕色容量瓶中，加入10 mL BHT溶液，超声混匀，冷却至室温，用二氯甲烷定容。再取1 mL置于50 mL 棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容，混匀后用于高效液相色谱分析。

（2）试样测定

在2.3参考色谱条件下，对试样液进行色谱分析，以保留时间和光谱特征定性，以试样中番茄红素组分峰面积与标准曲线比较定量。 

（1）将番茄红素标准贮备液稀释125倍后，在472nm波长下测得试样的吸光度为0.3AU，根据公式2-1，测得番茄红素标准贮备液的浓度为108.7mg/L。

（2）标准曲线绘制

以番茄红素组分峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。如图1，线性相关系数r=0.999094，线性关系良好。线性方程如公式3-1

Y=101954.83X-32158.60…………………………………………3-1

式中

Y——番茄红素组分的峰面积

X——番茄红素的浓度（mg/L）

            图1. 番茄红素标准工作曲线

（3）系统重复性测试数据

连续进样5针，比较在同等条件下峰面积的相对标准偏差，结果见表1。峰面积及保留时间相对标准偏差均小于1%，系统重复性良好。

         表1 系统重复性测试数据表

（4）含量测定结果

番茄制品中番茄红素的含量测定

根据标定的标准品的浓度、标准品峰面积和样品的峰面积计算番茄红素的浓度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。