2022-08-29 18:08:16, 食品安全的守护者 山东美正生物科技有限公司
检测方法概述
碱性磷酸酶(ALP)和乳过氧化物酶(LPO)属于酶类,具有高度的专一催化活性,可通过测定其相应底物或产物的光学反应来确定酶活性。
ALP检测方法
90年代以前,ALP 活性的检测方法只有比色法,检测限最低约为500 mU/L,该值是早期欧盟和美国判断巴氏杀菌乳ALP阴性或阳性的标准。2004年,中国农业农村部发布的NY/T 801-2004 《生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定》标准中,规定了苯酚法来进行生鲜牛乳及乳制品中ALP的活度测定。
近年来,新方法层出不穷,如,荧光法、发光法、电化学法等,与比色法相比,这些方法在灵敏度、特异性、稳定性及检测速度等方面都有了很大提高。
2003年,随着荧光法和发光法的发展,美国国家州际奶业运输委员会(NCIMS)对巴氏杀菌奶条例(PMO)进行了修改,判定标准调整至350mU/L。
2006年,欧盟(EU)实验室工作组也推荐采用350mU/L作为判定标准,同时还设定了一个目标值100mU/L,如果乳品厂生产的巴氏奶的ALP活性超过此水平,就要对该加工厂进行安全审查。
2021年,中国农业农村部部发布NY/T 3799-2020 《生乳及其制品中碱性磷酸酶活性的测定 发光法》中规定,若样品中ALP活性≥350mU/L,则样品疑似阳性,需通过试验确认是否存在耐热型碱性磷酸酶或复活型碱性磷酸酶。
LPO检测方法
目前,国内外有关LPO检测方法的研究较多,大多是基于颜色反应,利用酶促反应原理,借助分光光度计测定酶活大小。
常用的显色剂有2,2''-连氢基-双(3-乙基苯并嚷吡咯咻-6-磺酸)、二氨盐(ABTS)、3,3'',5,5'' -四甲基联苯胺(TMB)、愈创木酚、苯胺及邻苯二胺等。
中国食品科学技术学会发布的T/CIFST 008-2022 《乳中乳过氧化物酶活性的测定 比色法》中,使用TMB作为底物,通过比色法测定乳中LPO的活性,规定在温度20 ℃-30℃、pH 6.5-7.2条件下,每分钟催化氧化1μmol底物TMB所需要的LPO的量表述为1个乳过氧化物酶单位,即1U。
随着乳企对方法实用性、便捷性要求的提高,商品化酶检测试剂盒逐渐被乳企企业和相关检测单位接受,成为目前市场主流应用产品。
参考文献:
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