耗材专区 | EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氢大麻酚代谢物并以GC-MS定量

01

实验过程

1.1 仪器与试剂 

所有试剂均为分析纯或更高。

THCCOOH（100.0±0.6 μg/mL）和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化试剂，均购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司；

人工尿液（PH：5.7-500mL），购自福州飞净生物科技有限公司；

乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

EmporeTM 膜式固相萃取柱：4215SD-C18，购自美国CDS公司；

1.2 工作液配制 

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

取12个15mL离心管，分别装入3mL尿液样品，再加入不同体积的THCCOOH标准使用液（加标量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng），每个标点进行平行两次制备。然后加入300μL氢氧化钾溶液（10mol/L）,在60℃水浴环境下水解15min取出后冷却至室温，再以冰醋酸调节pH值到4.0~4.5。

EmporeTM固相萃取柱（C18, 7mm/3mL）预先用150μL甲醇进行活化，之后进行上样（在重力作用下使样品自然流下），上样结束后用750μL甲醇-水溶液（50：50）淋洗萃取柱，在690mmHg真空状态下干燥5min，最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液（75：25）进行洗脱。

1.3.2 净化与浓缩

洗脱液经40℃氮吹至干，然后加入100μL衍生试剂（MSTFA+1%TMCS），在60℃水浴条件下衍生20min，转移至样品瓶待 GC-MS分析。

1.3.3 标准曲线配制

取6个20mL样品瓶，分别加入不同体积THCCOOH标准使用溶液，加入THCCOOH的质量分别为3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，参照与加标样品制备同等浓缩、衍生条件进行前处理，待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

进样口温度：290℃；进样模式：不分流进样；流速：1.0mL/min；

柱温：100℃保持1min，然后以30℃/min的速度升至300℃，保持5min。