解决方案|高效液相色谱法测定乳制品中牛磺酸

前 言

牛磺酸是一种结构简单的含硫氨基酸，在动物体内具有广泛的生物学活性，化学名称为2-氨基乙酸，牛磺酸主要存在于动物组织的细胞质中。牛磺酸不但是我们体内需要的重要营 养素之一，而且对婴儿大脑神经发育具有深远影响。人类的肝脏是合成牛磺酸蛋白质的场所，但是体内合成的牛磺酸常不能满足婴儿的生理需要，婴儿需要经常通过从外界摄取的渠 道补充牛磺酸。

本文根据国家标准GB5413.26—2010《婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定》， 建立了利用高效液相色谱测定奶粉中牛磺酸的方法，供相关人员参考。

LC-5520液相色谱仪

PART ONE

实验部分

实验原理

样品用水溶解，用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。取上清液用丹磺酰氯衍生反应，衍生物经C18反相色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。

仪器设备与试剂

LC-5520 液相色谱仪（紫外检测器）；

AS-405 自动进样器；

DM-101 在线脱气机；

乙腈（CH3CN）：色谱纯；

冰乙酸（CH3COOH）：分析纯；

盐酸（HCl）：分析纯；

无水碳酸钠（Na2CO3）：分析纯；

亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6] ：分析纯；

乙酸锌[Zn(CH3COO)2] ：分析纯；

乙酸钠[Na(CH3COO)] ：分析纯；

盐酸甲胺（甲胺盐酸盐）（CH3NH2·HCl）：分析纯；

丹磺酰氯（5-二甲氨基萘-1-磺酰氯）：色谱纯；

牛磺酸标准品：纯度≥99%。

实验条件

色谱柱：C18 反相色谱柱（粒径 5 μm，250 mm×4.6 mm）

流动相：10 mmol/L 乙酸钠缓冲液—乙腈 ＝ 70+30。

流速：1.0 mL/min。

检测波长：254 nm。

柱温：室温。

进样量：20 μL。

样品前处理

提取：

称取固体样品 1 g～5 g，液体样品 5 g～30 g 试样（精确至 0.01 g），于 100 mL 容 量瓶中，加入 80 mL 温水（50 ℃～60 ℃）溶解，充分混匀，置超声波振荡器上振荡 10 min， 冷却到室温。加 1.0 mL 沉淀剂亚铁氰化钾溶液，涡旋混合，1.0 mL 沉淀剂乙酸锌溶液， 涡旋混合，用水定容至刻度，充分混匀，试液于 5000 转/分钟下离心 10 min，取上清液 备用。

衍生：

吸取 1.00 mL 上述上清液到 10 mL 具塞玻璃试管中，加入 1.00 mL 碳酸钠缓冲液，1.00 mL 丹磺酰氯溶液，充分混合，室温避光衍生反应 2 h（1 h 后需摇晃 1 次），加入0.10 mL 盐酸甲胺溶液涡旋混合，以终止反应，避光静置至沉淀完全。取上清液经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，取滤液备用。

PART TWO

实验结果

谱图

样品检测

精密度测试

PART THREE

实验总结

本文用 LC-5520 高效液相色谱分析乳品中牛磺酸的含量，线性范围良好，线性相关系数≥ 0.999。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值未超过算术平均值的 10%，符合国家标准要求。

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