使用固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法对水产品中阿维菌素和伊维菌素残留量进行测定

2018-11-10 12:25:18, 黄悯嘉等安捷伦科技（中国）有限公司

使用固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法对水产品中阿维菌素和伊维菌素残留量进行测定

世界上的水产养殖业正在逐年扩大，这迫使其越来越多地依赖化学药品的投入。由于放养密度很高，生物体间更易互相传染病菌，为了保证水产品的产量，化学药品的用量正在不断增加，尤其是杀虫剂和抗生素。然而，这些药品的残留可能有毒性，也可能会使一些敏感个体发生过敏反应。为了保证消费者的健康，动物源性产品中化学药物的残留量检测越来越受到关注。

阿维菌素 (Avermectin) 和伊维菌素 (Ivermectin) 是一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，是一类被广泛使用的农用或兽用杀虫、杀螨剂。本方法参照食品安全国家标准 GB 29695-2013，建立了水产品中阿维菌素和伊维菌素残留分析的高效液相色谱-荧光检测法，适用于罗非鱼等水产品中阿维菌素和伊维菌素残留量的检测。

阿维菌素和伊维菌素分析

参照食品安全国家标准 GB 29695-2013，称取试样 5 ± 0.05 g，于 50 mL 聚丙烯离心管中，加乙腈 15 mL，涡旋混合 1 min，超声 30 min， 5000 r/min 离心 5 min，取上清液于另一50 mL 聚丙烯离心管中。残渣中加入乙腈 10 mL，重复提取一次，合并两次提取液。在提取液中加入正己烷 10 mL，充分涡旋混合 1 min， 5000 r/min 离心 5 min，弃去上层正己烷层。提取液中再加正己烷 10 mL，重复提取一次，弃正己烷层，待固相萃取净化。固相萃取操作流程图如图 1 所示。

图 1. 固相萃取操作流程图

参照国家标准，在上述离心管中分别加入衍生化试剂 A（N-甲基咪唑 1 mL 和乙腈 1 mL混匀）100 µL，盖紧盖子，涡旋混合30 s，再加入衍生化试剂 B （三氟乙酸酐 1 mL 和乙腈 2 mL 混匀）150 µL，盖紧盖子，涡旋混合 30 s，密封避光，室温下衍生15 min，加甲醇 750 µL，涡旋混合 30 s，过滤后置于 2 mL 样品瓶。使用配备了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 快速柱的高效液相色谱 - 荧光检测系统对待测样品溶液中的阿维菌素和伊维菌素进行快速分析，液相色谱条件如表 1 所示。

表 1. 液相色谱条件

本文所述固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测方法可实现对水产品中阿维菌素和伊维菌素的基线分离和检测。对比阿维菌素和伊维菌素标准样品与罗非鱼空白基质的色谱图（图 2）可以看出，在空白基质色谱图中阿维菌素和伊维菌素的出峰位置处无杂峰干扰，表明本文所用 Agilent Mega Bond Elut SI 固相萃取小柱去除了大部分的干扰杂质，其对样品的净化效果优于 GB 29695-2013中所述氧化铝柱。此外，本方法利用安捷伦专利的 Poroshell 120EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析，整个方法运行时间不到10 min，与 GB 29695-2013 方法相比节约了三分之二的时间，在节省溶剂的同时，大大提高了工作效率。

图 2. 200 ng/mL 阿维菌素和伊维菌素标准样品（红色）与罗非鱼空白基质（蓝色）的色谱叠加图

如图 3 和图 4 所示，本文所述方法在线性范围 5-200 ng/mL 内阿维菌素和伊维菌素的线性相关性良好，且具有极高的方法重复性。通过计算信噪比得到，该方法检测限为 1 µg/kg (S/N > 3)，定量限为 2 µg/kg (S/N > 10)。如表 2 所示，在 2-40 µg/kg 的添加水平下，阿维菌素和伊维菌素的回收率为 90.7%-102.9%，RSD ≤ 8%(n = 4)，由此可看出该方法的准确度和精密度均优于 GB 29695-2013 的分析要求。