2021-03-27 07:59:19, SCIEX SCIEX
质粒DNA作为基因制剂的传递载体,被广泛应用于基因治疗、细胞治疗、疫苗等生物制品领域。质粒DNA主要有三种拓扑结构,超螺旋、开环和线性形式。超螺旋质粒在细胞转染及基因表达方面优于其他形式,所以,高质量、高纯度的超螺旋质粒DNA是确保基因制剂安全性和有效性的前提条件。欧洲药物评审组织(EMEA)在关于“慢病毒载体的生产与开发”指导方针中指出,有必要在慢病毒载体的生产中使用高质量的质粒DNA。美国食品药品监督管理局(FDA)用于基因制剂质粒DNA指导意见的要求,超螺旋质粒百分比需大于80%。我国《生物技术药物研究开发和质量控制》一书中指出,对于质粒类生物制品超螺旋比例一般要大于90%。
在质粒的研发和生产过程中,质粒的纯化工艺研究,制剂配方工艺研究,大规模生产的批次一致性,都需要对质粒的超螺旋结构进行质控检测。
图1. PA800 Plus药物分析系统与dsDNA 1000 试剂盒
使用SCIEX PA800 Plus药物分析系统,结合激光诱导荧光检测器(LIF)和dsDNA 1000 试剂盒(货号477410)(图1),可以对质粒的三种拓扑结构进行高效分离,并能准确计算超螺旋百分比,用于质粒的纯度检测(图2)。
该毛细管凝胶电泳(CGE-LIF)方法具有如下优势:
分离度好:超螺旋、开环及线性质粒可以得到基线分离,易于产品的定量及质控;
重复性好:超螺旋质粒峰的迁移时间相对标准偏差(RSD)<0.3%,纯度RSD<0.5%(n=18);
适用范围广:适用于不同大小范围的质粒的分析;
操作简单:具有商品化的试剂盒,自动化程度高;
灵敏度高:使用激光诱导荧光的检测模式,可提供超高的检测灵敏度;
符合法规:仪器具有操作(OQ)认证,操作软件能够进行权限设置和审计追踪。
图2 CGE-LIF方法分析质粒的纯度
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