测定血液中的地西泮——固相萃取-液相色谱法

地西泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，是一种中枢精神系统镇定剂，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的治疗。近年来，地西泮在临床的应用越来越广泛，此类药物在中毒药物中居首位，中毒和疑似中毒的病例常见，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对血清中的地西泮进行固相萃取、富集，用高效液相色谱仪进行检测。

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

地西泮，1000mg/L，坛墨质检；

甲醇（色谱纯）；

乙酸铵（分析纯）：配制成0.2mol/L，PH=6的水溶液；

C18固相萃取柱（60mg/3mL莱伯泰科）；

实验用水：超纯水。

1.2 标准工作液的配置

取1mL地西泮标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

取20 μL标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2μg/mL标准工作液。

1.3实验方法

1.3.1 样品制备

取1mL血液，加入100 μL的标准工作液，混匀，使血样中地西泮的加标浓度为200 μg/L，用水稀释到5 mL，涡旋5min，5000 rad/min离心10 min。取全部上清液，待固相萃取处理。

同时做样品空白。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至1mL以下，用甲醇定容至1mL，待测。

图1   地西泮的SPE 1000 方法

1.3.3 HPLC测定水中地西泮

色谱柱：C18，5μm，4.6mm*150mm；

波    长：230nm；

流    速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

流动相：甲醇：水=65:35V/V