测定饲料中的地西泮——固相萃取-液相色谱法

地西泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的治疗。由于，地西泮添加到饲料中可以提高动物的生长速度和减少饲料用量，故部分养殖企业为谋取更多效益，在饲料中非法添加地西泮，我国农业部与质量监察部门已经严格禁止在饲料中添加地西泮。地西泮具有蓄毒性，在饲料中长期添加，会导致其在肌肉组织中富集，从而进一步危害消费者健康，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对饲料中的地西泮进行固相萃取富集，用高效液相色谱仪进行检测。

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

地西泮，1000mg/L，坛墨质检；

甲醇（色谱纯）；

甲酸（分析纯）；

氨水（分析纯）；

PCX混合型阳离子交换柱，（60mg/3mL莱伯泰科）；

实验用水：超纯水。

1.2 标准工作液的配置

取1mL地西泮标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

取20μL 的标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2 μg/mL标准工作液。

1.3实验方法

1.3.1 样品制备

将饲料样品打碎，称取2.0g样品，加入400μL的标准工作液，使饲料中地西泮的加标浓度为0.4mg/kg，加入20mL乙腈，涡旋5min，超声20min，5000rad/min离心10min,取5mL上清液,待固相萃取处理。

同时做样品空白。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至1mL以下，甲醇定容至1mL，待测。

图1   地西泮的SPE富集方法

1.3.3 HPLC测定水中地西泮

色谱柱：C18，5μm，4.6nm*150mm；

波    长：230nm；

流    速：1.0mL/min ；

进样量：20μL；

流动相：甲醇：水=65:35V/V