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Transwell 细胞迁移实验实验步骤:1. 将transwell小室反面朝上,架在24孔板上,每个transwell小室底面“涂”10μl 纤维连接蛋白(0.5mg/ml),在超净台内风干(大约1小时),使纤维连接蛋白固化于膜底面。将transwell小室放回24孔板孔内。2. 消化细胞并计数,取105个细胞置于1.5mlEP管中,2000rpm离心5分钟,去上清,加入200μl无血清培养基重悬细胞,加入transwell小室中。下层小室加入10%FBS的RPMI1640培养基。放入37℃孵箱中培养5个小时。3. 染色:①取出insert, 用棉签擦除里面的细胞,并用PBS(用600微升放在另一个孔中)轻轻洗掉insert里面剩余细胞,然后取出insert放纸上把多余的水吸净。②取出transwell小室,用棉签擦除里面的细胞,并用PBS轻轻洗掉里面剩余细胞。用甲醇、冰醋酸按照3:1配制成混合液,固定transwell小室反面的细胞10分钟。用结晶紫染色剂染色并固定15分钟。③自来水轻轻涮洗insert,3-5次即可。(如果正面能看见颜色,就用棉签檫一下檫干净。)④用滤纸吸干insert里残留的水,放在通风橱中风干1分钟。⑤手术刀片,小心沿小室边缘将膜剔下,反面朝上放在载玻片上。立即滴二甲苯约15µl于膜上,倾斜载玻片,用滤纸吸走多余的二甲苯。滴中性树胶约15µl于膜上,加盖玻片,排除气泡。4. 显微镜下将每张膜随机取5个视野进行拍照,随后观察计数,平均值即为该膜一个视野所通过膜的细胞数平均值。5. 赛尔生物细胞Transwell 迁移实例: 赛尔生物相关服务:MicroRNA相关服务siRNA干扰课题整体外包服务基因克隆服务慢病毒包装服务腺病毒服务稳定细胞株筛选服务蛋白表达服务抗体制备服务DNA与蛋白相互作用研究噬菌体展示技术服务cDNA文库构建干细胞研究基金申请,标书撰写,专利申请,课题设计等 联系咨询我们地址:天津市津南区小站镇黄台工业园嘉园道8号(华若英)官网:www.saierbio.com QQ:2774964243 QQ:58214061邮箱:info@saierbio.com 电话******8001手机******吴海东
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