(1. PromoChrom Technologies Ltd. 2. 北京绿绵科技有限公司)
安非他明、麻黄碱具有有多种生理活性和药理疗效,如镇静、镇痛、镇咳等,还具有一定的毒性和麻醉性,连续服用易产生习惯成瘾问题。近年来,吸毒和药物滥用对人们的生活和社会安定构成了极大威胁,成为备受关注的社会问题,因此,开发出准确、快速、简便的检测尿样等体液中毒品类物质的分析方法具有重要意义。
本文将提供一种使用PromoChrom公司的SPE-04在线固相萃取仪结合液质联用技术直接、快速检测尿样中的9种碱性毒品的方法。样品经在线固相萃取净化后直接进入液质联用仪中分析,样品制备和仪器分析全部自动完成。
该方法也可直接转移至PromoChrom公司的离线固相萃取平台(SPE-01、SPE-03),萃取完成后,手动转移样品至液质联用仪进行分析。
1、仪器
高效液相色谱仪: Agilent 1260 Infinity LC。
质谱检测器:Agilent 6460A MSD。
在线固相萃取仪:SPE-04 Online SPE(带衍生功能),PromoChrom Technologies。
2、方法适用的目标物
目标分析物为amphetamine(安非他明), metamphetamine(甲基苯丙胺),MDA(4,5-亚甲基二氧基苯丙胺),MDMA(3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺),MDEA(甲基二乙醇胺), phentermine(芬特明),phenylpropanolamine(去甲麻黄碱),ephedrine(麻黄碱)和pseudoephedrine(伪麻黄碱)。
3、分析方法
取1mL尿液样品于样品瓶中(准确移取),直接用于固相萃取。
3.1 在线固相萃取条件
固相萃取柱: Bond Elut Plexa PCX,30 mg/3 mL,PromoChrom Technologies;(将方法略为调整后,也可以使用其它强阳离子交换柱)。
淋洗溶剂:溶剂1为甲醇;溶剂2为2%甲酸的内标溶液(含MDA-D5, MDMA-D5, MDEA-D6, amphetamine-D6, metaamphetamine-D9 各为500 ng/mL. 使用当天配制);溶剂3 为水;溶剂4为甲醇+氨水(90:10),氨水浓度为28-30%,使用当天配制);衍生试剂1为2%甲酸水溶液。
SPE-04在线固相萃取方法设置:
行号 | 操作 | 体积 | 流速 | 注释 |
0 | Elute C1 with 1 | 2.5 | 5 | 用甲醇预淋洗2.5毫升, 流速5毫升/分。 |
1 | Rinse vial with 2 | 1.7 | 5 | 将1.7毫升内标溶液混入样品,然后加回到SPE柱。同时甲酸使分析物带正电荷,便于被阳离子交换柱吸附。 |
2 | Rinse vial with 1 | 1.5 | 5 | 用甲醇清洗样品瓶,洗液加入SPE柱。 |
3 | Elute C1 with 4 | 0.2 | 5 | 将淋洗溶剂切换到溶剂4。 |
4 | Collect | 1.0 | 5 | 继续用溶剂4淋洗,收集1.0毫升组分。溶剂4里的氨水使碱性化合物的正电荷消除,便于洗脱。 |
5 | Load fraction to heater | 0.4 | 0 | 将0.6毫升组分和0.4毫升衍生试剂1(2%甲酸溶液)混合后导入衍生室。混合后可以中和组分的碱性并使组分溶液的组成和LC的起始流动相更接近,使HPLC分析的峰形和分离更好。 |
6 | Inject reactant | 0.5 | 5 | 将组分引入进样阀的样品环。环体积为20微升。 |
7 | Start LC | 1 | 0 | 触发LC-MS开始分析样品。 |
3.2 液质联用条件:
色谱柱:Poroshell 120 EC-C18, 3X50mm,2.7um,Agilent;
流动相:A为含0.1%甲酸的甲醇,B为0.1%甲酸水溶液;
流速:0.8 mL/min;
梯度淋洗的条件如下表:
Time(min) | 0.0 | 1.5 | 3.5 | 3.6 | 6.6 | 6.7 |
B% | 15 | 15 | 30 | 90 | 90 | 15 |
分析停止时间为7分,平衡时间为2分钟。
3.3 离线固相萃取方法
离线固相萃取仪:SPE-01或 SPE-04或 SPE-03,PromoChrom Technologies;
固相萃取柱: Bond Elut Plexa PCX,30 mg/3 mL,PromoChrom Technologies;(将方法略为调整后,也可以使用其它强阳离子交换柱)。
淋洗溶剂:溶剂1为甲醇,溶剂2为2%甲酸的内标溶液(含MDA-D5, MDMA-D5, MDEA-D6, amphetamine-D6, metaamphetamine-D9 各为500 ng/mL. 使用当天配制),溶剂3 为水,溶剂4为乙酸乙酯+乙醇+氨水(50:50:15,氨水浓度为28-30%,使用当天配制)。
样品:样品瓶中的尿样体积为0.7毫升(准确移取)。
离线固相萃取仪器方法设置:
行号 | 操作 | 体积 | 流速 | 注释 |
0 | Elute 1 | 5 | 2.5 | 用甲醇预淋洗2.5毫升, 流速5毫升/分。 |
1 | Rinse 2 | 5 | 1.7 | 将1.7毫升内标溶液混入样品,然后加回到SPE柱。在这一步,甲酸使碱性化合物带正电荷,便于被阳离子交换柱吸附。 |
2 | Rinse 1 | 5 | 1.5 | 用甲醇清洗样品瓶,洗液加入SPE柱。 |
3 | Elute 4 | 5 | 0.2 | 将淋洗溶剂切换到溶剂4。 |
4 | Collect1 | 5 | 1.5 | 继续用溶剂4淋洗,收集1.5毫升组分。溶剂4里的氨水使碱性化合物的正电荷消除,便于洗脱。 |
收集的组分在45度下用氮吹仪浓缩近干。用1.0 mL HPLC的起始流动相定容。在本方法中,起始流动相为甲醇+水+甲酸(15:85:0.1)。溶剂4 中的乙醇在浓缩过程中可以把组分里的水带走,不会照成浓缩后有水滴残存。
更多应用文章:
多柱联用同时萃取水中不同极性污染物;
高效液相色谱法直接测定血浆中的雌性激素;
高效液相色谱法直接测定水中超痕量苯并(a)芘;
Investigation of Self-Calibrated, Fine-Isotope-Line Fit Scoring in Combined HPLC-Fourier Transform Orbital Trapping MS for Candidate Formulae Elimination;
Characterizing Phytochemicals in Camelina Seed Meal by LC-MSN;
SPE产品介绍:http://www.lumtech.com.cn/products/product_id-235.html
【精彩回顾】20161118 样品前处理与色谱分析的在线结合
【点击下图,进入视频播放】
关于绿绵科技
北京绿绵科技有限公司(简称:绿绵科技)2001年成立以体现客户服务最高价值为宗旨,专业精神和技能为广大实验分析工作者提供样品前处理、样品制备分析、实验数据精确分析和管理全面解决方案,致力于协助客户提高分析检测的效率和水平。
产品目录:Labos实验室运营系统 MassWorks分子式识别系统
德国LUMTECH分析制备净化三合一液相色谱 GPC凝胶净化前处理
样品前处理全面解决方案 纳喷离子源
气源全系列 离子迁移谱
Agilent中端气相液相 牛津台式核磁
GE生命科学设备 TissueGnostics全景组织细胞分析系统生物试剂耗材
溶液配制仪(有机无机) 生物/试剂/耗材 Buffer缓冲液
电话:010-82676061/2/3/4/5/6/7 传真:010-81676068 E-mail:info@lumtech.com.cn
欢迎关注绿绵公众号