2024-08-20 13:57:21
作为一个实验老手,在其他实验上信手捏来,唯独在构质粒上还处于菜鸟阶段,每次都「谨小慎微」!最近和 00 后小师妹一起做分子克隆,我真是被上了一课:
做DNA片段扩增时
我
多次检查试剂的添加量和仪器的设置参数,还特意增加了 PCR 循环次数
小师妹
对着 protocol 设定 PCR 反应体系,设置好循环次数后就去看文献了
结果出来后发现,师妹的结果没问题,我的却莫名出现了非特异性扩增问题。
在质粒提取时
我
担心质粒提取量不足,加大了菌液的使用量
小师妹
按比例分了几份,取适当的量之后就开始做提取了
没想到过多的菌液会导致裂解不彻底、杂质变多,后续的纯化步骤变得困难,质粒的纯度和得率反而下降。
全程目睹这一切的导师直呼让我放轻松,然而分子克隆实验涉及到核酸提取、酶切、连接、转化等诸多步骤,每个步骤确实都需要精确的操作和严格的控制,而且这些实验结果对后续的研究又至关重要……一想到这些,真的很难保持松弛啊!
TIANGEN与丁香园
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