2024-01-22 16:17:10, 赛默飞生命科学 赛默飞世尔科技生命科学产品
细胞骨架不仅能够作为细胞支架,还参与细胞器转运、细胞分裂、细胞运动和信号传导,因而常作为细胞健康和疾病进程研究的核心。细胞骨架结构由多种蛋白纤维组成,包括:微丝(肌动蛋白)、微管(肌球蛋白、驱动蛋白和动力蛋白)和中间纤维 [1]。在固定细胞/组织和活细胞中,可以使用一系列染料、抗体和荧光蛋白,通过荧光成像法来识别这些蛋白纤维。
今天我们一起来盘一盘常见的细胞骨架标记方法有哪些吧。文末还有互动活动,细胞骨架染料免费送,不要错过哦~
首先,送给太长不读的宝子们的版本(动动手指直接收):
固定细胞/组织标记
【不挑物种的经典方法】鬼笔环肽偶联物
鬼笔环肽是一种双环肽,当与荧光染料偶联时,可用于标记固定和透化细胞中的肌动蛋白。鬼笔环肽鬼笔环肽与 Alexa Fluor 染料的荧光偶联物是大多数应用的首选 F-actin染料,因为它们在整个光谱范围内都具有明亮的信号和光稳定性。鬼笔环肽偶联物可与大的或小的肌动蛋白微丝结合,其中鬼笔环肽与肌动蛋白Actin亚基之间的化学计量比为 1:1,但不会与 G-actin单体结合。本方法不适用于石蜡包埋的切片。
图1. 三重荧光标记的麂皮成纤维细胞
(细胞骨架使用鬼笔环肽-AF488标记,货号A12379)
【想标哪里标哪里】细胞骨架抗体
我们可提供适于不同应用的肌动蛋白和微管蛋白高品质一抗,包括免疫荧光,免疫组化,WB。对于成像应用,抗体可用于固定细胞、冰冻组织切片和石蜡包埋切片。在靶点多样性和检测通道灵活性方面,抗体法标记细胞骨架有着突出优势。热门细胞骨架一抗请见下表:
图2. 双重荧光标记的大鼠原代皮层神经元细胞
(细胞骨架标记抗体货号MA1-118)
【高效+方便+便宜】ReadyProbes系列细胞骨架染料(文末有样品送哦)
ReadyProbes试剂ActinGreen™ 488 和 ActinRed™ 555用于标记固定和透化细胞/组织中的 F-肌动蛋白,具有与传统鬼笔环肽偶联物相当的高度亲和力,也与其他固定细胞染料兼容,包括抗体、荧光染料、 和 Qdot® 量子点染料。
ReadyProbes试剂是简单、便捷max的肌动蛋白荧光染色方法——直接滴加即可,无需计算,无需稀释,无需移液,其中:
ActinGreen™ 488 试剂用的是发绿色荧光的 Alexa Fluor® 488 染料,非常亮且光稳定。
图3. 三重荧光标记的Hela细胞
(细胞骨架使用ActinGreen 488标记,货号R37110)
ActinRed™ 555 试剂用的是发红橙色荧光的四甲基罗丹明染料,也有出色的光谱特性。
图4. 三重荧光标记的HeLa细胞
(细胞骨架使用ActinGreen 555标记,货号R37112)
【可死可活,不挑样品】CellMask肌动蛋白染料
CellMask 肌动蛋白示踪染料用于在活细胞中进行纤维状肌动蛋白的荧光成像。CellMask 可渗透细胞,对肌动蛋白细胞骨架进行特异、均匀且明亮的染色。
多重应用:活细胞染色之后,细胞可固定用于多重分析,如免疫荧光、免疫细胞化学和免疫组化实验。
多色可选:CellMask Actin有绿色、橙色和深红三种颜色可选。
使用简单:仅需将1X染色工作液加入细胞,孵育15~60分钟,洗涤后即可成像。
低毒性:在24小时内 CellMask不会造成可检测的的细胞毒性。
图5. 三重荧光标记的大鼠十二指肠冰冻切片
(细胞骨架使用CellMask Actin Deep Red标记,货号A57245)
活细胞标记
【高效标记活细胞微管】Tubulin Tracker染料
Taxol/paclitaxel紫杉醇和 Taxotere/ docetaxel多西紫杉醇偶联物可用于活细胞中细胞骨架行为的终点分析,对聚合微管蛋白进行高效标记。该方法不推荐用于动态细胞成像,因为可能会干扰细胞功能,包括微管蛋白不稳定性动力学和细胞分裂。
Tubulin Tracker Green 试剂(紫杉醇偶联物)和 Tubulin Tracker Deep Red 试剂(多西紫杉醇偶联物)可通透过活细胞的细胞膜并对聚合微管蛋白进行特异性染色。细胞固定会导致染色信号消失。
图6. 单色荧光标记的大鼠皮质神经元
(细胞骨架使用Tubulin Tracker Deep Red标记,T34077)
【长时间不掉“色”】CellLight 细胞骨架荧光融合蛋白
CellLight 试剂可标记活细胞中的肌动蛋白、微管蛋白或踝蛋白,使研究人员能够追踪细胞骨架动力学。
多重应用:CellLight 荧光融合蛋白可与其他荧光探针在多重分析中一起标记活细胞或固定后细胞以进行共定位研究。
靶点可选:这类即用型试剂可表达特定荧光融合蛋白,分别靶向 β-肌动蛋白Actine 的 N-端、β-微管蛋白Tubulin的 N-端或踝蛋白Talin的 C-端。
简单无毒:CellLight 标记只需一个简单的转染步骤,与使用细胞染料一样,几乎无毒性和化学破坏性。
图7. 四重荧光标记的U2OS细胞
(细胞骨架使用CellLight Talin-GFP标记,货号C10611)
【可死可活,不挑样品】CellMask肌动蛋白染料
详见上文“固定细胞/组织标记”部分。
图8. 双重荧光标记的HeLa球状体
(细胞骨架使用CellMask Actin Deep Red标记,货号A57245)
*参考文献:
[1] Pollard TD and Goldman RD (2018). Cold Spring Harb Perspect Biol. 10(7):a030288. PMID: 29967009.
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请在评论中备注需要哪个颜色(数字编号即可):
绿色:Alexa Fluor 488, Ex/Em: 496/519 nm
红色:罗丹明, Ex/Em: 555/565 nm
*参与截至1月23日下午5点。样品预计于下周五(1月26日)之前发货,如有特殊要求,请私信我们。
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