2023-12-18 17:17:57
你是否会为qPCR的反应程序设置而烦恼?
为什么师兄实验记录本上95℃预变性是15 min
我用的FP217试剂盒说明书上却只需要2 min?
其实qPCR反应程序的设置与试剂里的DNA聚合酶修饰有关。不同类型的DNA聚合酶修饰,特性各不相同:
常见的DNA聚合酶修饰类型
化学修饰:热稳定性高,适应PCR反应的高温要求;同时抗抑制性强,适用于复杂样本。但成本较高, 热启动时间较长。
抗体修饰:高特异性,可以减少非特异性产物。抗抑制性强,适用于含有抑制物的样本。但制备过程复杂,成本可能较高。
不同修饰酶酶活的释放时间存在较大差异。其中抗体修饰酶,仅需2 min即可完全释放酶活。化学修饰的酶释放酶活性需要较长,如果预变性时间过短,酶活性无法完全释放,轻则扩增效率低,重则CT值变大。因此不同酶的qPCR预变性时间有较大差异。
FastReal 快速荧光定量PCR预混试剂
(SYBR Green)(目录号FP217)
新型抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶
配合优化的qPCR Buffer体系, 快速释放酶活,缩短反应时间,同时保证试剂高扩增效率和产物特异性, 提高实验效率,让定量PCR实验更加快速高效。
扩增曲线起峰早,荧光值高,特异性强
可兼容快速和普通qPCR仪
透明试剂管,方便观察试剂余量
实验例
以玉米基因NK603构建的质粒为模板,进行6个10倍梯度(4.8×102- 4.8×107 copies/μl)稀释,使用FP217进行定量分析。
FP217在宽广的模板量区间内均具有良好扩增曲线和线性关系,定量结果优异。同时可兼容不同型号的qPCR定量仪器,配合TGreat Real 96定量效果更佳。
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