单克隆细胞株的筛选 - xCELLigence RTCA eSight软件推出稀释克隆模块

2023-10-19 11:19:18, 安捷伦细胞分析 安捷伦细胞分析事业部(BioTek)


单克隆稳定细胞株广泛应用于生物制药行业,包括重组蛋白和抗体的生产、检测分析的工具细胞、免疫治疗药物的开发筛选等研究领域。其中稳定细胞株的单克隆性是保证产品质量的关键,也是药品监管机构对稳定细胞株最重要的审查要求。


单克隆细胞系的制备方法有很多,每种方法都有各自的优点和不足。其中应用最广泛的是有限稀释法,也就是通过一定的梯度稀释接种基因整合稳定的重组细胞群,然后人工挑选出单个克隆的细胞,进一步鉴定和克隆筛选出的单克隆细胞株。但是这种方法在不借助自动成像设备的情况下需要耗费大量人工,而且很难提供可靠的数据,不利于后期的申报与审查,仅做一轮有限稀释很难确定所选细胞是单克隆。

单克隆细胞株之筛选


因此,Agilent xCELLigence RTCA eSight软件推出稀释克隆模块,通过5X镜全孔成像,将全自动实时细胞成像(明场+荧光)与有限稀释法结合,最大程度的解放双手,只需稀释铺板后,仪器自动捕获单个克隆细胞的生长,并通过简单的软件设置就可以获得完整的单个克隆细胞生长曲线。减少工作量的同时完善筛选过程的数据记录,同时通过精确到1个细胞的分析提高单克隆筛选的准确性。


我们同步推出应用简报,详细描述了基于明场和荧光成像下HT1080-RFP细胞的单克隆筛选的详细步骤。只需梯度稀释待筛选的细胞,按照2 cells/well铺板,软件设置每4-6 hours在5X镜下采集一次全孔成像数据,实时监测10-14天来记录单克隆的形成。分别根据明场和明场+荧光的,成像结果进行数据分析。明场Mask可以精确识别单个细胞,并根据明场汇合度绘制单克隆细胞生长曲线(图1、Video 1);而根据荧光成像结果,荧光Mask同样可以精确识别单个细胞,并可以准确区分碎片和细胞,而单克隆细胞可以通过荧光细胞数来绘制绝对生长曲线(图2、Video 1)。


图1. 根据 eSight稀释克隆模块筛选单克隆细胞系。(A)细胞铺板11天后细胞整板预览图(橙色为明场mask)。(B) D1 孔的不同时间点的图像显示该孔细胞是单克隆。第 0 天中的蓝框显示了单个细胞的放大图像。(C) G2 孔的不同时间点的图像显示该细胞不是单克隆。第 0 天的蓝框显示了四个单细胞的放大图像。


图 2.  利用eSight 系统的稀释克隆模块跟踪和监测单克隆细胞的形成。(A)单克隆细胞的孔的荧光和明场的merge,碎片用黄色箭头表示,第 0 天和第 1 天的红色方框显示小圆框所示相应区域的放大,第 0 天显示该孔只有一个红色荧光细胞。(B)利用 eSight 软件绘制孔中红色细胞数量与时间的关系图,软件验证了该孔最初只有单个荧光细胞,证明这个细胞群是由单个细胞形成的。


总结

Agilent xCELLigence RTCA eSight是目前市场上唯一一台可以同时进行无标记阻抗和活细胞成像多维分析的仪器,成像系统搭载5X、10X、20X从低倍到高倍的物镜,不仅实现低倍镜下全孔成像,也能实现高倍镜下细胞行为观察。同时eSight成像兼容明场和红绿蓝三色荧光,满足同一个细胞多个颜色的细胞分析。仪器共有5个板位,1-3板位可以同时进行阻抗和成像双维度实时细胞分析,4和5板位作为开放的成像板位可以兼容不同的细胞培养耗材。


本应用将eSight自动成像功能与有限稀释法结合,通过明场或者荧光成像实现单克隆细胞自动筛选。客户只需简单设置就能实现实时全自动的细胞克隆形成监测。我们的应用数据也表明,这种结合可以更快、更可靠的开发单克隆稳定细胞株:

1

提供单克隆细胞生长信息

2

操作简单,无人值守

3

大大节省人力、时间和成本

4

提供单克隆细Plate view提供全孔板数据预览,
实现快速筛选胞生长信息

5

提供完整的单克隆筛选过程成像数据记录


Agilent xCELLigence RTCA eSight多功能实时细胞分析仪


扫码下载点击原文下载《Limiting Dilution Method Using the Agilent xCELLigence RTCA eSight System》



关于安捷伦细胞分析
安捷伦细胞分析平台包括xCELLigence RTCA实时细胞分析仪、Novocyte系列流式细胞仪、Seahorse能量代谢分析仪以及Synergy系列微孔板检测和Cytation 系列细胞微孔板成像。安捷伦细胞分析平台聚焦细胞基因治疗产品的开发全程,作为适配新一代疗法的强大分析工具,提供多方位的细胞效力检测和深度的细胞分析,并致力于研发、生产质控以及临床的全方位检测与分析。

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