氨基酸分析仪检测透明胶质类中的蛋白水解氨基酸

2023-08-31 15:00:51, 大昌华嘉 大昌华嘉科学仪器


   摘要   

本品为未知含量及种类的氨基酸配制而成的透明胶质类物质,使用Biochrom30+全自动氨基酸分析仪,对其所含的游离氨基酸组分及含量进行分析。结果表明该未知样中氨基酸各单个氨基酸含量的浓度见附页结果表。其中样AE01氨基酸总含量为31.969 umol/mL,AE03氨基酸总含量为36.790 umol/mL。

一、样品前处理

1、所用试剂

1.1 Loading Buffer:钠盐系统,pH 2.2

1.2 浓盐酸,浓度≥36%,优级纯

1.3 6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀

1.4 水:去离子水

1.5 17种氨基酸标准品

2、前处理设备

1) 分析天平:精度为 0.0001g

2) 移液枪及枪头

3) 一次性注射器及0.22um滤膜

4) 低范围pH试纸

5) 真空干燥烘箱

6) 无油真空泵

7) 电热平板及称量瓶


3、样品制备(参考shipinzhongAAS的测定)

移液枪准确移取试样1mL,加入水解管中,加入10mL 6mol/L盐酸(1.3),冷冻3min⁓5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气步骤3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。将水解管放入真空干燥箱中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液枪取适量水解液于称量瓶中,在电热平板上60℃浓缩至干,必要时加入少许水(1.4),重复蒸干1-2次,加入适量PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解(1.1),振荡混匀后,吸取溶液通过0.22 μm 滤膜后,转移至进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。


二、分析方法描述(Biochrom 30+)

氨基酸分析仪分析方法参数:

1) 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm

2) 分离程序:

运行时间:经分析时间+再生时间 59.35min

3) 反应单元温度:135°C

4) 检测波长:570nm、440nm同时检测


三、样品中氨基酸含量的计算

样品测定液氨基酸的含量按式(1)计算:

Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式中:

Ci ——样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Cs ——氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Ai ——试样测定液氨基酸i的峰面积;

As ——氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

F ——样品稀释倍数。


附、透明胶质类中的蛋白水解氨基酸其分析图谱及做样结果:

图1.  样品AE01

图2.  样品AE03

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