Juno原阵容-Sana Bio公布现货型CAR T 临床前数据

上个月，来自美国的基因与细胞治疗公司Sana Biotechnology 在AACR和Nature Communication上积极公布了现货型CAR T产品SC291的临床前数据，导致在一周时间内Sana股价飙升。SC291是基于Sana自主的HIP技术平台的通用型CD19 CAR T疗法，所谓HIP就是Hypoimmune，通过CRISPR-Cas9编辑B2M, CIITA基因破坏HLA-Ⅰ和Ⅱ的表达，以及通过编辑TRAC基因阻止TCRα和CD3ε的表达，克服了异体CAR T的免疫排斥问题，同时表达了CD47逃逸先天免疫的杀伤并作为体内安全开关（图1）。

图1. Sana Biotechnology HIP CAR T 细胞改造策略

Sana研发团队在Nature Communication < Hypoimmune anti-CD19 chimeric antigen receptor T cells provide lasting tumor control in fully immunocompetent allogeneic humanized mice >文章中指出HIP CAR T细胞在基因编辑后与对照allo CAR T细胞（anti-CD19 EGFRt CAR T）的体内体外肿瘤杀伤能力相当，表明基因编辑并未影响CAR T的抗肿瘤效力。

值得关注的是在重复杀伤（体内，体外）实验中，HIP CAR T细胞展现出持续的抗肿瘤能力。研发人员在Agilent xCELLigence RTCA上进行4次体外悬浮靶细胞重复杀伤实验，HIP CAR T与对照allo CAR T一样保持着持续的抗肿瘤能力（图2）。对共培养90h后的CAR T细胞进行耗竭标志物的检测，其中TIM3, TIGIT, LAG3, CD39, CTLA-4均没有表达，而PD-1的表达较共培养前以及与对照allo CAR T细胞也没有发生明显上调（图3）。体内实验同样进行了肿瘤细胞重复注射，意外发现HIP CAR T较allo CAR T展现出更持久的体内抗肿瘤能力（图4）。

图2. Agilent xCELLigence RTCA检测CAR T对悬浮靶细胞Nalm6的重复杀伤

图3. 流式检测重复杀伤后T细胞耗竭标记物的表达

图4. HIP CAR T细胞在小鼠体内重复接种肿瘤后仍保持抗肿瘤能力

在安全性方面，SC291表达CD47释放“别吃我”信号来保护HIP CAR T免受宿主先天免疫细胞的清除，而当安全事件发生时，通过注射SIRPα蛋白与CD47的特异性结合关闭“别吃我”信号，进而先天免疫细胞NK和Macrophage清除HIP CAR T细胞（图5, 6）。

另外，研究者在完全免疫能力的异体人源化小鼠上验证了HIP CAR T较对照allo CAR T细胞能更好的抑制肿瘤进展，并且有更好的抗肿瘤持久性，表明SC291作为现货型异体通用CAR T产品有很高的安全性和持续抗肿瘤效力。目前SC291已经取得FDA IND批准，并已开展在B细胞肿瘤上的临床试验。

图5.  Agilent xCELLigence RTCA检测SIRPα存在下NK细胞对HIP CAR T细胞的清除

图6. HIP CAR T在体内通过靶向CD47安全开关可以被有效清除

Sana Biotechnology 公司由Juno前高管 Hans Bishop创办，自成立起就备受瞩目。本文中公布的临床前数据是基于HIP平台的现货型异体anti-CD19 CAR T产品，通过CRISPR-Cas9基因编辑解决GVHD问题，同时添加CD47安全开关双重保障产品的药效以及体内安全性。

除了研究人员的完美设计外，Sana利用安捷伦实时细胞分析仪xCELLigence RTCA MP作为CAR T细胞杀伤检测工具进行药效筛选，RTCA还被应用在CAR T细胞的多轮次重复杀伤检测，模拟体内的连续杀伤过程。同时结合流式细胞术检测重复杀伤后的T细胞耗竭标志物的表达，可以帮助我们了解细胞治疗产品的持久性以及预测体内药效。

安捷伦细胞分析事业部致力于细胞治疗整体方案的开发，文章中使用的xCELLigence RTCA检测平台除了阻抗水平的检测，RTCA eSight还可以实现无标记阻抗和成像（明场、红绿蓝荧光）双维度的数据输出。还有智能化NovoCyte系列流式细胞仪，提供多达30个荧光通道的灵活配置，精确分析细胞marker的表达以及多因子的释放。RTCA和Novocyte检测平台的联合可以为细胞治疗药效研究提供全维度的数据检测。