宸安科普:染色后冻存3个月,流式质谱的样本依旧稳定!

2023-05-25 14:06:35, Gray 上海宸安生物科技有限公司




01

实验概览

“流式样本染色之后可以存放多久?”这是很多老师会问我们的一个问题。

在流式检测中,常会出现因样本规划、运输延迟、机时不足等原因造成已染色的新鲜样本无法及时上机检测的情况,这便要求抗体与样本在结合后有足够的稳定性。在此前的测试中,样本在由宸安生物的CytoATLAS® Antibody流式质谱抗体进行染色后,可于4℃的环境下稳定保存7天。

而本次实验,我们则着重探究对已染色的PBMC样本进行长时间冻存的可行性,在-80℃的条件下将已染色的样本放置90天(3个月)




02

实验结果

如下图所示,即使经过长达90天的冻存,样本依旧十分稳定,其分群并未因极端温度或长期放置而产生显著变化:

不仅是细胞表面的标志物,胞内的细胞因子(TNFα、IFNγ、Granzyme B)也保持了与第0天极度接近的检测水平:

由此可见,CytoATLAS® Antibody流式质谱抗体及其配套辅助试剂在-80℃长期冻存后仍拥有优异的使用稳定性。这项优势能为流式质谱技术的使用者提供便利,帮助他们应对更多的科研和临床应用场景。




03

实验设计

回顾:流式质谱样本制备

| 染色:根据实验方案,将抗体试剂加入到外周血全血样本中,室温孵育15分钟

| 红细胞裂解:加入溶血素,涡旋混匀后室温孵育10分钟

| 清洗:室温下离心5分钟,弃上清,再加入细胞染色液重悬样本,室温下离心5分钟,弃上清

| 嵌入剂Ir染色:将Ir-DNA嵌合试剂加入到细胞固定剂中,涡旋混匀后加入到样本中,室温孵育10分钟

| 冻存:将已染色的样本平均分为2份,其中1份进行上机测试,另1份置于-80℃的冰箱冻存90天再取出测试

| 清洗:加入细胞染色液重悬样本,室温下离心5分钟,弃上清,重复2次

| 上样:加入上样溶液重悬样本,室温下离心5分钟,弃上清,再次加入上样溶液,准备上机分析

抗体信息

1

IgD - 145Nd

2

CD27 - 146Nd

3

HLA-DR -1 51Eu

4

CD8 - 152Sm

5

CD45RA - 153Eu

6

CD123/IL-3R - 154Sm

7

CD19 - 160Gd

8

CD14 - 164Dy

9

CD66b - 165Ho

10

CD197/CCR7 - 167Er

11

CD4 - 168Er

12

CD45 - 171Yb

13

TCRγδ - 174Yb

14

CD3 - 209Bi

15

Granzyme B - 172Yb

16

IFN-γ - 173Yb

17

TNFa - 176Yb

18

DNA1 – 191Ir

19

DNA2 – 193Ir

20

Live/Dead – 198Pt

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