TLC薄层色谱检测丨Amersham小课堂

2023-05-08 21:30:25, Yu Haikuan

你的成像仪何必只限于WB

今天我们开展“小成像有大用途”的第一课:

TLC薄层色谱的检测

跟着Amersham小课堂

一起解锁多功能成像仪的新用途

1903年，俄罗斯植物学家Mikhail Tswett通过分离有色植物色素获得突破并发明了层析；时间快进到1982年，当时Cytiva的前身Pharmacia开发了快速高效液相层析 (FPLC) ，后续诞生了成为纯化代名词的ÄKTA。而我们今天故事的主角是有关于色谱与成像的故事

薄层色谱层析 (TLC)

相信大家高中生物课都有做过纸层析分离叶绿体色素的实验，那么考考大家还记得图上4个条带分别代表什么成分吗？(点击下方图片，即可显示答案)

图1：纸层析法分离叶绿体色素

薄层色谱层析

(Thin layer chromatography, TLC)

TLC是20世纪50年代从经典柱色谱法及纸色谱法的基础上发展起来的一种平面色谱技术；以涂布于支持板上的支持物（如薄层层析硅胶板上的硅胶）作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。TLC是一种快速，灵敏地分离微量物质的方法，是最简单的色谱技术之一。因其操作简便，分离效率好，分析速度快，广泛应用于医药分析，天然产物分析，中草药鉴别以及生物分子分析等方面。

TLC在生物分子鉴定中的应用

图2：结核分歧杆菌不对称生长模式

结核分歧杆菌是引起结核病的病原体，全球每年约有150万人死于结核病。被称为新生儿“出生第一针”的卡介苗主要就是用于结核病的预防。结核分歧杆菌显著的特征是由真菌-阿拉比糖半乳糖-肽聚糖复合物（简称mAGP）组成的复杂胞膜，在其细胞周期中也具有“不对称的”生长模式，使其群体更能适应生存压力如抗生素的影响。来自美国耶鲁大学Kuldeepkumar R Gupta等人研究发现PgfA蛋白是一种重要的极性生长因子，与结合杆菌不对称生长密切相关，相关文献发表在了eLife杂志。

图3：C耗尽MMmpL3或PgfA；D过表达PgfA

文章利用CRISPRi技术沉默基因表达，在指定的时间点耗尽细胞中的MmpL3或PgfA，并通过薄层色谱 (TLC) 分析细胞膜中的海藻糖单菌酸盐 (TMM) 和海藻糖霉菌酸酯(TDM)（菌膜发育重要组成部分），同时与过表达PgfA进行对比。研究表明PgfA是大的周质结构域的内膜蛋白，并且该蛋白的某些部分与TMM结合，为抗菌药物的靶点提供有利的来源。

薄层色谱层析TCL显色可以归纳为一看、二照、三碘、四显。

在日光下观察有色物质，划出斑点的位置

在紫外灯下观察有无荧光斑点

对于紫外吸收弱的物质，可利用碘缸染色生成棕色或黄色斑点

可根据化合物种类使用不同显色剂进行显色