细胞成像常见问题,快来看看有没有你的心头大患

2023-05-03 18:57:56, 赛默飞生命科学 赛默飞世尔科技生命科学产品


无论是分析细胞功能、细胞结构,在组织或细胞内检测靶点共定位,还是在时间和空间维度追踪细胞动态,荧光成像都是极其重要的技术。从样品处理到制备染色,从显微成像到数据分析,荧光成像实验也是非常复杂、问题很多的:


  • 为什么都是一样的染料我的细胞染不出文献的效果?

  • 同一支抗体细胞免疫荧光效果很好,但是组织信号很弱?

  • 染核蛋白的时候荧光全在胞浆里,核蛋白染不出来咋办?

  • ……


如果你也有以上问题,近期赛默飞与丁香园联合举办了「舞动分子,美颜细胞——从流程到应用,轻松玩转荧光成像」主题直播,解决你的活细胞成像 & 免疫荧光实验困扰,还进行了常见问题的排查与解析。识别下方二维码,回看精彩讲座



讲座期间我们收到很多现场观众的问题,今天先来看看最具代表性的几个问题要怎么解决。


文末还有有奖互动,不要错过哦。


多色成像配色

我想进行多色成像,该如何选择合适的染料组合?

首先,您需要确定自己的成像系统配备的滤光片组、光立方或激光波长,因为这些因素决定着您的波长选择。通常,滤光片组都以包含这些波长的染料命名(例如,“FITC” 滤光片组适于荧光素、Alexa Fluor 488、GFP和其他多数“绿色”染料)。


其次,您应该搜索一下这些波长范围内的染料选择及其光谱,了解哪些染料与滤光片规格的重叠程度.


最后,要使染料的光谱彼此尽可能分开,以减小滤光片组间重叠的几率。通常,不同染料的其他特性会有所不同。例如,Alexa Fluor 488染料比荧光素光稳定性更强,对 pH更不敏感。我们的在线荧光光谱查看器工具能帮助您比较多个染料的光谱,并将其与您的滤光片组或激光特性相比对。


扫码进入在线荧光光谱查看器工具


细胞免疫荧光

请问悬浮细胞的免疫荧光,用什么方法进行贴壁效果更好?

悬浮细胞的贴壁效果主要取决于玻片(悬浮细胞专用的免疫荧光玻片)。可以使用多聚赖氨酸处理过的玻片,用移液管吸取适量的悬浮细胞液,滴在载玻片上,等待一段时间,让液体自由的铺散开来,以形成一单分子层结构,并于室温下让细胞悬浮液自由干燥,使细胞不易随液体流动。用免疫荧光专用的画笔在干燥的液面边缘划圈,以免后续的操作时液体流失。


核蛋白染色

染核蛋白的时候荧光全在胞浆里,核蛋白染不出来,但是之前染的时候荧光是在胞核里的。请问这是什么原因,如何改进?

可能原因是透化不够充分,染核蛋白时透化要加Trypsin处理,并延长透化时间。


细胞膜染色

红色细胞膜荧光探针,总是染完之后在镜下看一片红,并没有像DAPI标记细胞核一样,完整标记细胞膜,不知跟什么原因有关系,怎么能改进一下?

细胞膜荧光探针,有的可兼容固定,但不兼容透化操作;且细胞膜荧光探针在持续一定时间后,会内化进入细胞内部,不同荧光探针持续时间不一致,建议参考说明书或咨询产品技术支持获取该荧光探针的详细信息。


细胞示踪

我想做细胞示踪实验,请问要怎么选染料呀?

细胞示踪染料一般需要满足以下几个要求:

  • 可标记细胞结构,如细胞膜或细胞器。

  • 生物惰性或无毒:对活细胞或组织无显著毒性。

  • 检测方法与应用匹配:如生物素衍生物常用作神经元极性示踪剂,但是需要固定和透化后才能检测到生物素信号,因此不适用活细胞成像检测。


Invitrogen细胞示踪染料对比








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如果你还有没有解决的【细胞成像】技术问题,欢迎在评论区留言,不仅可得到赛默飞技术天团的专业解答,点赞数前5名还有超实用手机支架一个。学习玩耍两不误,快来留下你的问题吧~


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