汉诺生物联合SCIEX推出ZenoTOF™+gPeptide™高通量结构特异糖基化质谱解决方案

2023-04-23 16:17:06, 汉诺生物 SCIEX

基于结构特异糖基化搜索引擎gPeptide^™，快速、高灵敏及带电子活化解离的ZenoTOF^™ 7600，汉诺生物联合SCIEX推出高通量结构特异糖基化质谱解决方案。

汉诺生物-结构特异糖基化搜索引擎gPeptide

Figure 1. The main GUI of gPeptide^™

基于内置的全备的结构特异理论N-连接糖数据库及序列结构指纹的靶向搜索，gPeptide^™明确区分同分子组成（包括同单糖组成）的N-连接糖序列结构；同步给出糖基化结构特异定性定量信息。

用户只需“一次建库”和“一步搜索”即可获得假阳性控制后的结构特异定性定量搜索结果；“一键视图”即可获得一级质谱同位素轮廓指纹比对图、多肽骨架和N-连接糖序列结构图形解离图、带多肽骨架和N-连接糖序列结构各自匹配二级质谱碎片注释的二级质谱图。

Figure 2. One-click visualization of gPeptide^™

“一次建库”：生成假阳性控制所需的理论靶向和诱饵数据库

“一步搜索”：得到最终的定性和定量结果

“一键视图”：查看每个ID的文本和视图输出结果

SCIEX ZenoTOF^™7600高分辨质谱

EAD电子激活解离技术

Figure 3. ZenoTOF^™7600 and EAD (Pictures from https://ppc.sciex.com.cn/)

Zeno^™trap(Zeno阱)：可将灵敏度提高5-20倍，鉴定和定量低丰度离子

电子激活解离 (EAD)：基于自由电子的碎裂机制，可调节电子能量的特点适用于糖基化多肽与蛋白质

高通量分析：MS/MS扫描速率高达133 Hz

应用实例

组织N-糖蛋白质组学

一、概览

样本：肝组织

液相色谱：1 hr梯度

质谱：SCIEX ZenoTOF^™7600

* 解离方法：CID + EAD

完整N-糖肽搜索引擎：HANOL gPeptide^™

* 理论糖链库：875个单糖组成，75888个结构

* 唾液酸链接异构、岩藻糖位置异构、序列异构、motif结构（bisect）等结构特征的靶向搜索和确认

* 基于靶向-诱饵搜索的假阳性控制：FDR≤1%

Figure 4. MS-only base-peak chromatogram.

二：鉴定规模

Figure 5. Statistics of intact N-glycopeptides IDs from 1 hr RPLC-MS/MS analysis of liver tissue.

三：视图结果

位点决定性碎片离子明确的位点定位

结构诊断性碎片离子明确的序列结构

A. 高甘露糖型聚糖示例

Figure 6. Representative high-mannose N-glycosylation identified from liver tissue N-glycoprotein fibrinogen gamma chain (N-glycosite 78) using Sciex zenoTOF^™ 7600 (CID + EDA) and HANOL intact N-glycopeptide search engine gPeptide^™. (a) Isotopic envelope fingerprinting map (bar-experimental, dot-theoretical) of the precursor ion, (b, c) graphical fragmentation maps of the N-glycan moiety and peptide backbone, (d) annotated MS/MS spectrum; blue square = N-acetylglucosamine, green circle = mannose. *means containing one N-acetylglucosamine residue.

B. 复杂型糖型聚糖示例

Figure 7. Representative complex N-glycosylation identified from liver tissue N-glycoprotein fibronectin (N-glycosite 1007) using Sciex zenoTOF™ 7600 (CID + EAD) and HANOL intact N-glycopeptide search engine gPeptide™. (a) Isotopic envelope fingerprinting map (bar-experimental, dot-theoretical) of the precursor ion, (b, c) graphical fragmentation maps of the N-glycan moiety and peptide backbone, (d) annotated MS/MS spectrum; blue square = N-acetylglucosamine, green circle = mannose， red triangle = fucose, yellow circle = galactose, purple diamond = sialic acid. *means containing one N-acetylglucosamine residue.

三、杂合型糖型聚糖示例

Figure 8. Representative hybrid N-glycosylation identified from human liver tissue N-glycoprotein lysosome-associated membrane glycoprotein 1 (N-glycosite 103) using Sciex zenoTOF™ 7600 (CID + EAD) and HANOL intact N-glycopeptide search engine gPeptide™. (a) Isotopic envelope fingerprinting map (bar-experimental, dot-theoretical) of the precursor ion, (b, c) graphical fragmentation maps of the N-glycan moiety and peptide backbone, (d) annotated MS/MS spectrum; blue square = N-acetylglucosamine, green circle = mannose， red triangle = fucose, yellow circle = galactose, purple diamond = sialic acid. *means containing one N-acetylglucosamine residue.

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