一文带你了解His标签蛋白纯化

目前，在重组蛋白行业，利用标签进行纯化，已经是一种成熟、高效的纯化方法。所谓标签蛋白，是指将蛋白质的N端或C端与某种蛋白质或多肽标签进行融合表达，得到的融合蛋白。由于标签与某些物质（如金属离子、葡聚糖等）具有特异性的吸附作用，因此可以用于蛋白质的捕获、富集与纯化。

Cytiva作为全球纯化领域的先行者，在标签蛋白纯化领域拥有种类广泛、质量上乘的产品家族。今天，我们将为您带来His标签蛋白的纯化解决方案。

His标签由多个组氨酸残基构成（一般为6到10个，6个最为常见）。由于组氨酸上的N原子能够与某些过渡金属离子形成配位键，所以利用这一特性，可以使用含有金属离子配基的填料来捕获和纯化His标签重组蛋白。His标签分子量小，对重组蛋白的性质影响很小，一般情况下不需要切除；而且成本较低，易于表达，是目前最常用的蛋白质标签。

在His标签纯化领域，Cytiva也拥有对应的纯化产品，今天，我们将为您介绍其中主要的一类：以镍离子为基础的亲和层析产品。

Ni Sepharose 6 Fast Flow

Ni Sepharose High Performance

Ni Sepharose excel

TALON Superflow

目前，His标签蛋白纯化填料拥有5 mL至5 L的多种规格，充分满足从条件筛选、科学研究到商业化生产的多样化需求。此外，为了方便您的操作，提高实验效率，Cytiva还提供了多种预包装形式，包括：

Ni Sepharose 6 Fast Flow（FF）由粒径90 μm的高度交联琼脂糖颗粒构成，配基上螯合有镍离子，是目前最常用的His标签亲和层析填料之一。作为Cytiva镍离子亲和填料的主力军，Ni Sepharose 6 Fast Flow具有如下显著优势：

Ni Sepharose High Performance（HP）是一款以高度交联的琼脂糖为基架、镍离子螯合基团作为配基的亲和层析填料。与另外两款填料相比，它具有最小的粒径（34 μm），所以使用HP填料进行纯化时，可以得到更高的分辨率，样品的纯度也会得到显著提高，适合用于对纯度有较高要求的实验。

Ni Sepharose excel填料是一款拥有极强镍离子结合能力的His标签亲和层析填料，对缓冲液的兼容能力强，能够耐受100 mM的EDTA，在实验过程中，可以省去缓冲液置换等操作，节省时间，提高效率。此外，由于镍离子极低的脱落，使用碱清洗填料时可以做到无需脱镍直接清洗，避免交叉污染的同时，提高了效率。

TALON Superflow是一款钴离子亲和填料，与镍离子相比，钴离子与His标签蛋白的特异性亲和更强，但载量较小，适合用于纯度比收率更重要的His标签蛋白纯化实验。

材料与方法：本实验中，使用HiScreen Ni FF层析柱（预装有FF填料）纯化带有(His)6标签的绿色荧光蛋白GFP-(His)6，蛋白由大肠杆菌表达，粗样品共计40 mL。

实验结果：层析结果如下图所示。通过咪唑溶液线性梯度洗脱，在490 nm波长下，检测到洗脱峰，证明目的蛋白被成功洗脱。

SDS-PAGE结果如下图所示，在pool 2中得到纯度较高的GFP-(His)6，纯度大于95%，共收集到目标蛋白42 mg。

根据案例中的实验结果，不难看出，Cytiva的镍离子填料在His标签蛋白的纯化上应用效果好，纯度与收率均有保证。未来，Cytiva将持续在纯化领域不断耕耘，为您的科学研究保驾护航。

课程题目：《His标签纯化历险记》

1. His标签蛋白纯化原理及过程
2. 如何挑选合适的纯化产品
3. His标签纯化常见问题及避“坑”指南