ChatGPT都出来抢工作了，你还在手动铺细胞吗？

2023-03-24 09:03:54, 安捷伦细胞分析安捷伦细胞分析事业部（BioTek）

大师姐

小师妹，怎么用左手吃饭呀？

别提了，今天铺了50块板子，右手抬不起来了。

小师妹

大师姐

你这实验通量这么大呀，有个设备特别适合你，MultiFlo FX 多功能微孔板分液器，不仅可以高通量自动化细胞铺板，还可以高通量自动化细胞清洗。

有这好东西，可以处理什么孔板呀？

小师妹

大师姐

不仅可以处理 96 孔板，还可处理 384 孔板，1536 孔板哦。

那太棒了，师姐，快带我去看看！

小师妹

MultiFlo FX 助力高通量自动化细胞样品准备，你值得拥有！

MicroFlo Select *

助力基于细胞的高通量筛选

* 注：MicroFlo Select 是 MultiFlo FX 的历史版本

随着大数据时代的来临，药物筛选使用的孔板从 96 孔板逐步向 384 孔板、1536 孔板转移。孔板密度的成倍增加让检测的样品数量成倍的增加，需要的样品体积成倍的缩小，大大节约了试剂成本。但是对实验人员的挑战也越来越大。

“研究者的宝贵时间应该用在创新、创造，而不是花在繁重的重复性劳动上，比如细胞铺板、换液、洗板这些任务，是时候换一种方式了。”

自动化多通道分液系统可以在十几秒到几分钟之内解决高密度（96-1536）孔板细胞铺板问题。

除此之外，自动化操作还最大程度地降低手工操作导致的人为误差，提高实验结果的可信度，便于建立标准化流程。为了验证 MicroFlo Select 铺板的均一性，本文通过 CellTiter-Glo 试剂盒来检测每孔的实际细胞数量。

具体实验流程如下：

将细胞（h-mesothelioma 或 CHO-M1）原液培养物用胰蛋白酶消化，血细胞计数板计数，以 200 个细胞 /µL 的浓度重悬于新鲜培养基中。使用 MicroFlo Select 将 4µL 细胞分配到 1536 孔板中，即每孔 800 个细胞。在 37°C，5% CO₂ 下培养 4-6 小时，待细胞贴壁之后，加入 CellTiter-Glo 检测试剂，在室温下孵育 10 分钟（图 1）。

图 1. 验证 MicroFlo Select 铺板均一性的实验流程

检测结果如图 2 所示：MicroFlo Select 的铺板均一性非常优异。

图 2. MicroFlo Select 进行 1536 孔板铺板的均一性结果

为了进一步验证 MicroFlo Select 铺板均一性的可信度，实验人员还进行了统计学结果的计算，如表 1 所示：对两块 1536 孔板分别进行分液，一块孔板每孔加 4µL 培养基，另一块孔板每孔加 4µL 细胞，最终计算得到的 Z 因子为 0.75，从这个结果也可看出 MicroFlo Select 分液功能的可靠性。

表 1. MicroFlo Select 进行 1536 孔板整板铺板的统计学结果

除了上述结果之外，作者对 MicroFlo Select 提出了更为苛刻的挑战，通过控制加样体积，在一块 1536 孔板中加入不同数量的细胞，之后补齐培养基到 4µL ，借助 CellTiter-Glo 试剂盒来验证理论细胞数量和实际细胞活力的线性关系。检测结果依旧没有让人失望，线性结果如图 3 所示，统计学结果如表 2 所示。从该结果可以看出 MicroFlo Select 铺板的理论细胞数量和实际细胞活力具有非常好的线性关系。

图 3.理论细胞数量和实际细胞活力的线性关系

表 2.理论细胞数量和实际细胞活力线性关系的统计学结果

MultiFlo FX 助力高通量细胞迁移实验

Oris 实验是一种非常方便的评估细胞迁移的方法，但是对于 Oris 来说，有个不可忽略的细节是圆形无细胞区域形成之后，该区域边缘的细胞贴壁不牢，很容易影响最终的实验结果，因此需要对细胞进行清洗。但是做过细胞清洗的童鞋们都知道洗细胞不能太温柔，也不能太用力，不能洗太多，也不能洗太少，一个不小心，要么没洗干净，要么凭空消失。而 MultiFlo FX 可以快速解除你的烦恼，它不仅可以实现自动化细胞铺板，还可进行稳定高效的细胞清洗。

本案例中前期的细胞铺板、细胞清洗及加药过程通过 MultiFlo FX 完成，后续的长时程的动力学检测通过 CB 智能化平台（Cytation 联合 Biospa 8）完成。

图 4. Oris 细胞迁移实验流程

实验流程如下：

首先使用 MultiFlo FX 将 100µL（或 20µL）制备好的 HT-1080 和成纤维细胞悬液分别以 30000，20000 细胞 / 孔（或 10000，7000 细胞 / 孔）的浓度添加到 Oris Pro 96 孔板（或 Oris Pro 384 孔板）的孔中。

待细胞贴壁，孔中央的生物相容性凝胶（BCG）溶解之后，用 MultiFlo FX 清洗，去除圆形无细胞区域边缘贴壁不牢的细胞（图 5），以确保细胞迁移结果的准确性和可重复性。

图 5. MultiFlo FX 清洗之前（A）和 MultiFlo FX 清洗之后（B）的细胞状态

之后，通过 MultiFlo FX 把梯度稀释的细胞松弛素 D 分别以 100µL（或 20µL）的体积加入到 96 孔（或 384 孔）的微孔板中。

最后，通过 CB 智能化平台（Cytation 联合 Biospa 8）对细胞的迁移过程进行长时程的自动化拍摄，并通过 Gen5 软件进行数据分析，直接获得愈合曲线及愈合速率等结果。

图 6. 96 孔板未处理组 HT-1080 细胞的时间序列图片及分析结果

图 7. 96 孔板（A）和 384 孔板（B）愈合曲线的整板结果展示

从上述案例中可以看出，MultiFlo FX 可进行高通量，高精度的细胞铺板，并可完成稳定高效的细胞清洗，是开展高通量药物筛选，细胞功能实验的优异助手，且该设备可进行自动化对接，帮助客户实现高性价比的自动化操作。

高通量自动化细胞样品处理方案推荐

本文给大家分享了两个通过液体处理设备进行细胞铺板、细胞清洗的案例，虽然细胞铺板、细胞清洗是基础的常规操作，但是实验人员的操作手法对于后续实验结果有着非常大的影响。而 MultiFlo FX 可以最大程度的降低手工操作导致的人为误差，不仅可以实现全自动的细胞铺板，还可用于稳定精确的分液过程，比如加药，加检测试剂等。在此基础上 MultiFlo FX 还可以选配细胞清洗、细胞换液等功能，让您的实验流程更加稳定，高效。

兼容 6-1536 孔板

支持缓冲液、试剂、酶、微球、细胞等样品的分液

最多支持 4 种样品的平行独立分液

支持细胞清洗功能（洗板模块），呈角度的洗头最大程度的保护细胞

支持 3D 细胞换液功能（AMX 模块）

支持任意孔位，任意体积的加样功能（RAD 模块）

设计小巧，紧凑，适合在生物安全柜中使用

兼容自动化整合

CBM 智能化平台推荐

MulitFlo FX 作为一个高通量液体处理的设备，不仅可以单独使用，也可以兼容自动化整合，帮助客户实现更大程度的自动化操作。Agilent 细胞分析部门的 CBM 系统是一个非常小巧的智能化平台，可实现多板位，长时程的活细胞实验，帮助客户开展基于 2D 细胞、3D 细胞的细胞健康实验，毒性实验，杀伤实验，功能验证等，可为客户提供从细胞铺板，细胞清洗，到检测试剂或药物添加、再到检测成像，数据分析的完整解决方案。

自动化、无人值守

8 板位、独立开展不同实验

精确环境控制，适合长时程活细胞实验

细胞铺板、细胞清洗、加药、孵育、检测一体化操作

体积小巧，可放入生物安全柜使用

关于 BioTek

BioTek 是世界领先的多功能微孔板检测仪及软件的研发生产公司，拥有 54 年的悠久历史。BioTek 的 Synergy 系列多功能微孔板检测仪拥有灵活的功能配置和优异的检测结果，配合友好强大的操作软件，为广大用户提供了便捷高效的使用体验。服务科学，促进科学始终是我们追求的目标。2019 年 BioTek 加入安捷伦科技有限公司，成为细胞分析事业部的重要组成成员。

关于安捷伦

安捷伦科技有限公司（纽约证交所：A）是生命科学、诊断和应用化学市场领域的全球领导者，致力于为提升人类生活品质提供敏锐洞察和创新经验。安捷伦的仪器、软件、服务、解决方案和专家能够为客户最具挑战性的难题提供更可靠的答案。2022 财年，安捷伦营业收入为 68.5 亿美元，全球员工数约为 18,000 人。