10分的文章，一台Incucyte包圆了

2023-03-16 21:04:01, 陈老湿德国赛多利斯集团

细胞分析是研究人员用于体外细胞模型分析的金标准，可获得丰富的信息，在评价复杂疾病时尤其如此。由于基于细胞的分析方法变得日益复杂，因此从整体动态上的捕捉以及对细微的细胞事件的观察变得至关重要，但也为研究人员带来了众多挑战。

在细胞处于动态变化时，可能会发生意料之外或不同的变化，从而影响对分析的解读以及实验的成功。传统细胞观察的方法是每隔一段时间，将细胞从培养箱中拿出进行观察和拍摄，这不仅可能影响细胞生长，也无法连续。

可能您观察到的生长曲线是这样的：

但实际却是
这样的：

赛多利斯Incucyte® 实时活细胞分析系统可以帮您解决这个难题！

可直接在培养箱中进行连续数天、数周或数月的细胞实时成像和细胞健康、运动、形态和功能分析，适用于各种细胞类型，就问你香不香？

近期，一篇苏州大学医学院的抑制剂筛选文章^[1]正式发布，在这篇IF 10分左右的文章里，使用了很多Incucyte® 的数据，下面就跟随陈老湿一起来解读一下这篇论文。

骨肉瘤是儿童和青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤。化疗耐药性导致骨肉瘤患者对常规治疗的反应不良。新的有效治疗靶点和药物的发现仍然是骨肉瘤研究的主要焦点。核受体（NRs）已显示出新的癌症治疗靶点的巨大前景。在本研究中^[1]，使用针对NRs的29种调节剂进行了体外药物筛选，Incucyte® 实时活细胞分析系统是本次筛选使用的主力手段。

本文技术路线如下

IC即Incucyte® 实验缩写。实验中每1-2小时拍摄一次，通过计算细胞的汇合度来绘制生长曲线

实验解读

步骤1

在已知的29种NRs调节剂对3种骨肉瘤细胞系的单浓度（10uM）抑制实验发现，有5种化合物抑制作用比较强，但其中1种对正常成骨细胞有比较强的毒性作用。

Incucyte® 部分单浓度抑制实验数据：RAR激动剂CD437，PPAR抑制剂 T0070907对骨肉瘤细胞系U2OS有着很强的抑制作用

步骤2

发现4种化合物对多数骨肉瘤细胞系的抑制有着浓度依赖性，且对敲除了NRs的细胞系没有抑制作用，这些化合物是特异性的针对NRs来起到抑制作用。

Incucyte® 实验：化合物对细胞的抑制有着浓度依赖性

Incucyte® 实验：化合物对敲除了NRs的细胞系的抑制作用减弱

步骤5

转录组学和免疫印迹结果显示这些NRs调节剂可以通过调节PI3K/AKT/mTOR和ERK/mTOR通路来抑制骨肉瘤细胞的生长。阻断mTOR激活的DDIT4被鉴定为这些NRs的常见下游靶基因之一。DDIT4敲除显著减弱了这些NR调节剂对骨肉瘤细胞生长的抑制作用。

Incucyte® 实验：化合物对敲除了DDIT4的细胞系的抑制作用减弱

当然，这些抑制剂在小鼠体内实验中也显示了抑制作用，提示用这些NRs调节剂治疗是一种新的针对骨肉瘤的潜在治疗策略。

为什么越来越多的文章

使用Incucyte® ？

培养箱内可长达数周的连续观察，最短几分钟间隔拍摄；本次实验拍摄了10天以上，每隔1-2个小时读取一次，大大减少人力操作，并且不像流式需要对细胞进行预处理，使得结果更准确
6个板位，分别独立设置检测程序，可以兼容各种孔板和培养皿，通量高；这篇文章一次性筛选了29种化合物与4种细胞系的实验组
高效简便的模块化软件设置和数据分析，输出图片、视频、生长曲线等多指标多参数
大于100种优化过的活细胞专用荧光试剂、耗材及详尽的Protocol，文章数大于12000篇
拍摄对象种类多，悬浮细胞、贴壁细胞、类器官和肿瘤球都可以拍摄，还有进行划痕迁移和趋化实验等

下载文档

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-参考文献-

[1] Nuclear receptor modulators inhibit osteosarcoma cell proliferation and tumour growth by regulating the mTOR signaling pathway. Cell Death & Disease volume 14, Article number: 51 (2023)

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