细胞治疗产品快速放行的必备神器

2023-03-10 05:18:30, 赛多利斯德国赛多利斯集团

无菌是细胞治疗的一项关键质量属性。由于细胞治疗产品的微生物污染可能会导致接受者危及生命的感染，无菌检查是任何细胞治疗产品的放行检测中的关键组成部分。

目前的药典无菌检查需要14天才能确定排除污染，这对于有效期短的细胞疗法药品来说太长了，特别是那些用于治疗晚期病人的自体细胞疗法药品。因此，市场对不依赖于微生物生长的快速检测方法的需求与日俱增。

赛多利斯开发出了一种由高效DNA提取方案组成的检测系统：先用Microsart® 细菌提取试剂盒提取细菌DNA，然后，用Microsart™ATMP细菌检测试剂盒进行实时PCR测定。

在本研究中，Microsart® ATMP细菌实时PCR检测试剂盒的稳健性通过在三种不同的检出限，分别是2xLOD₉₅、LOD₉₅ 和½ LOD₉₅ 条件下用产孢梭菌（ATCC 19404）加入DMEM+5%FBS来证明，由5名参与者进行检测，他们是来自生物制药行业和医院附属实验室的代表。将样本冷冻运送给所有检测参与者，以便在他们所在的检测中心使用Microsart® 细菌提取试剂盒和Microsart® ATMP细菌检测试剂盒进行检测。

借助于贝塔测试，本研究的结果证明，基于实时PCR检测的细菌污染快速检测是一种稳健且适用的方法，可有助于降低风险从而有益于患者安全。

材料和方法

每名贝塔测试参与者都收到了所需的试剂盒和耗材（参见表1）。

表1. 用于检测的试剂盒和耗材

所需的实验室仪器和设备由参与者提供，如实时PCR 仪等。参与者未知的加标样本（参见表2）由赛多利斯提供。

表2. 用于贝塔测试的未知加标样本

所有贝塔测试参与者都遵守了以下步骤：

将1ml NEC 分别移液至2个处理管（处理管在Microsart® 细菌提取试剂盒中）中，并标记“NEC 1”和“NEC 2”。
将950μl 基质分别移液至管1至管8中（每管中已经含有50μl 未知加标样本），然后用漩涡混匀器混合。
根据Microsart® 细菌提取试剂盒检测方案，提取所有10个样本（2个NEC，8个未知）的DNA。
根据Microsart® ATMP 细菌检测试剂盒检测方案，对PCR 进行设置。
重复分析DNA 提取物（DNA 提取和PCR 设置的样本数量概述如表3所示）。
对于数据分析，遵循使用了手册中的说明。

表3. DNA提取和PCR设置的样本数量概述

结果

预期结果如表4所列。如果所有含有LOD₉₅ 和2x LOD₉₅ 浓度的产孢梭菌（ATCC 19404）的样本均已检测为阳性，每名参与者的8个NEC 中至少有6个为阴性，每名参与者的2个PCR 对照都必须为阴性，且每名参与者的2个PCR 阳性对照都为阳性，则满足可接受标准。

表4. 每名贝塔测试参与者的预期结果

讨论

根据参与者们的报告结果，5名参与者中有4名正确分析了所有未知样本。关于一名参与者未检测出最高浓度的样本而可以检测较低的浓度，可以认为这是由于操作错误而不是由于Microsart® ATMP 细菌检测试剂盒的灵敏度问题造成的。所有实验室都将这些样本正确地识别为阴性。

因此，每名参与者至少有6个阴性提取对照均为阴性，满足可接受标准。1名参与者在一个PCR 无模板对照中检测出一个阳性信号。我们的结论是：最有可能的原因是移液失误，因为该参与者已经按照预期检出了所有其他样本。

基于参与者都是未经培训的用户、仅由赛多利斯用户说明指导、使用各种不同的PCR仪、且大多没有专用的无DNA 实验室条件，该结果依然证明了本次测定的实验室间精密度和稳健性。

总结

综上所述，使用专门设计的Microsart® 细菌提取试剂盒和Microsart® ATMP 细菌检测试剂盒已被证明是一种快速、稳健的细菌污染总数检测工具。尤其是对时间要求敏感性较高的应用中，如有效期短的产品（如ATMPs、CAR-T 细胞和其他细胞疗法药品）的质量控制，它有助于降低风险，从而提高病人的安全性，因为它可以在病人治疗前获得质量控制检测结果。

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