新标准！GB 31658.22-2022 动物性食品中β-受体激动剂残留量的检测

本方案适用于猪肉、猪肝中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、西马特罗、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑丙罗、妥布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗、克仑潘特、羟甲基克仑特罗共18种β-受体激动剂单个或混合物残留量的检测。

(1) 混标储备液：精密称取适量克伦特罗等标准品，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为100μg/mL混标储备液(Cat.#: 47936)；

(2) 混标中间液Ⅰ：准确吸取适量混标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL混标中间液；

(3) 混标中间液Ⅱ：准确吸取适量混标中间液Ⅰ，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.01μg/mL混标中间液；

(4) 内标储备液：精密称取适量克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西马特罗-D7、齐帕特罗-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特罗-D9、盐酸马布特罗-D9、盐酸班布特罗-D9、克仑丙罗-D7、盐酸妥布特罗-D9、羟甲基克仑特罗-D6，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为10μg/mL内标储备液；

(5) 内标工作液：准确吸取适量内标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1μg/mL内标工作液。

(1) 称取样品2.0g于50mL塑料离心管中，加6mL 0.2mol/L乙酸铵缓冲液、40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，37℃避光水浴16h，放置室温，备用；

(2) 取备用液，加100μL内标工作液，涡旋混匀，8000rmp离心8min，取出上清；

(3) 向下层残渣加入5mL 0.1mol/L高氯酸溶液，涡旋5min, 8000rmp离心8min，取上清,与步骤(2)上清混匀，用高氯酸调pH值至1.0±0.2，8000rmp离心8min，取出上清；

(4) 将上清液用10mol/L NaOH溶液调pH值至10.0±0.5；

(5) 加乙酸乙酯15mL，涡旋5min, 5000rmp离心5min，取上层有机相；

(6) 下层水相中再加入10mL叔丁基甲醚，涡旋5min, 5000rmp离心5min，取上层有机相；

(7) 合并两次有机相，混匀，50 ℃水浴氮吹至干，用5mL 2%甲酸溶液超声1min,涡旋1min溶解残渣，备用。

注：0.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g,溶解于1000mL水中，用乙酸调pH值至5.2；

0.1mol/L高氯酸溶液：取高氯酸8.7mL，用水稀释至1000mL。

ProElut PXC 60mg/3mL (Cat.#: 68203)

(1)活化：用3mL甲醇和3mL 2%甲酸溶液活化小柱；

(2)上样：将备用液全部上柱，弃去流出液；

(3)淋洗：用3mL水和3mL甲醇淋洗小柱，弃去流出液，推干；

(4)洗脱：用3mL 5%氨水甲醇洗脱小柱，推干，接收流出液，混匀；

(5)重新溶解：将流出液在50℃水浴氮吹至近干，用0.5mL 甲醇-0.1%甲酸水(1:9)溶解残渣,混匀，过尼龙膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

UPLC 条件

色谱柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流  速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱 温：35℃

流动相：A: 0.1% 甲酸水溶液 B: 0.1% 甲酸乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

注：溴布特罗、利托君、克仑赛罗、马喷特罗和克仑潘特采用莱克多巴胺同位素内标定量，如果有5种药物一一对应的同位素内标，优先采用。