前“兔”无量 | 2023年第一波CNS来了!

2023-02-09 14:35:55, 陈老湿 德国赛多利斯集团


Incucyte® 实时活细胞分析系统Octet® 非标记分子互作系统是赛多利斯生物分析的两大拳头产品,相关文献均已超过5位数。2023年1月还未结束,就有两篇非常经典的CNS文章新鲜出炉!今天,陈老师就给大家唠唠这两篇佳作…

Incucyte® 首篇CNS

揭示免疫抑制阻断治疗(ICB)的新机制!【1】

很多针对诸如PD1/PDL1的免疫抑制剂为靶点的药物获批用于错配修复缺陷(MMR-d)癌症的精确治疗。MMR-d的肿瘤细胞由于错配修复,产生了大量的肿瘤抗原,ICB治疗后,这些肿瘤抗原可以被HLA依赖的CD8+T细胞识别并起到杀伤肿瘤细胞的作用。相当多的(MMR-d)癌症发生了HLA的突变,但是ICB依然有效果,说明除了CD8+T细胞,还有第二道防线。

荷兰癌症研究所人员的这篇Nature文章发现这个防线就是γδ T细胞(主要为Vδ1和Vδ3亚群)!γδ T (Vδ1和Vδ3细胞)高表达PD-1和杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR),具有非HLA依赖途径的细胞杀伤毒性。分离出来的γδ T细胞到底对肿瘤细胞杀伤作用如何?这个时候就自然而然用到Incucyte® 了!

将不同MMR-d的CRC(直肠癌)病人的PD1+(Vδ1或Vδ3细胞)和PD1-γδ T细胞的杀伤能力进行比较,首先发现PD1+γδ T细胞杀伤能力明显强于PD1-γδ T。

左图为PD1+T细胞,右图为PD1-T细胞对HCT-15靶细胞的杀伤,红色为赛多利斯 NucLight Red Lentivirus Reagent慢病毒红色荧光标记,绿色荧光为Caspase3/7活细胞染料标记。可见,PD1+T细胞的杀伤作用比较强。Incucyte® S3 实时活细胞分析系统,1小时自动拍摄一次。

Incucyte® 不仅可以做视频,还有强大的分析能力。你是否好奇:共培养杀伤中有效应T细胞和靶细胞,怎么只发现凋亡的靶细胞呢?答案就在下图。

使用Incucyte® S3 实时活细胞分析系统对红色和绿色叠加面积进行分析(凋亡的靶细胞)发现,HLA突变细胞(左图)和非HLA突变的靶细胞(右图)的杀伤效果,发现PD1+γδ T细胞对HLA突变细胞的杀伤效果更强。

这些杀伤效果到底是哪些?γδ T细胞上KIR有很多,比如(NKG2D, DNAM-1, NKp30 or NKp44等),到底是哪个起作用呢?作者又用Incucyte® 做了受体封闭实验。

用NKG2D抗体将γδ T细胞封闭后,发现γδ T细胞对靶细胞(LoVo,HLA-)的杀伤降低,说明该效应细胞通过NKG2D受体发生作用。

本文使用Incuyte® 实时活细胞分析系统对γδ T细胞杀伤毒性进行了全面的研究。

为什么如此多CNS文章选用
Incucyte® 来进行活细胞成像实验呢?

  • 长时程,不闲置:培养箱内可长达数周的连续观察,最短几分钟间隔自动拍摄,减少人力,防止过多操作对细胞的伤害

  • 通量高,通用性强:6个板位,分别独立设置检测程序,可以兼容各种孔板和培养皿

  • 智能化拍摄,AI分析:高效简便的模块化软件设置和数据分析,输出图片、视频、生长曲线等多指标多参数;本文就用了红绿叠加面积计算功能

  • 完整解决方案:大于100种优化过的活细胞专用荧光试剂、耗材及详尽的Protocol。文章数大于12000篇,是长时间活细胞成像产品中最多的;本文用了Incucyte® 配套的NucLight Red Lentivirus Reagent慢病毒和NucLight Red Lentivirus Reagent慢病毒试剂

  • 多种应用的配套拍摄模式:针对3D类器官、肿瘤球,线粒体膜电位,神经突,血管生成等应用都有配套的拍摄及分析模式


Octet® 首篇CNS

跨物种信号通路受体发现【2】

蜱虫是一种体外吸血寄生动物,是很多病原菌的载体。一般节肢动物可以分泌细胞因子样分子UPD来启动JAK–STAT信号通路,起到抗菌效果。但是蜱虫没有UPD基因,可能是利用了宿主的细胞因子IFN-γ启动这个信号通路,但是其机制尚不清楚。

马里兰大学的一个团队在Science的文章中首先通过pull-down垂钓和质谱鉴定发现IFN-γ的受体是Demo1,并用Octet® 验证了Demo1可以高亲和力和IFN-γ的结合。并且获得了良好的重复性!

左图为鼠IFN-γ与Demo1的亲和力,右图为鼠IFN-γ与人Demo1的亲和力。

Octet® RED384非标记分子互作系统,用HIS1K固化重组Demo1与不同浓度IFN-γ结合,重复三次。

作者也依次敲除了蜱虫Demo1和JAK–STAT信号通路上的一些基因,蜱虫的发育也残缺不全,说明Demo1是蜱虫发育和抗菌的重要受体,可以作为抗蜱虫和蜱虫所致相关疾病的药物靶点。

Octet® 分子互作分析系统的优势在于:

  • 非标记Direct binding是趋势,结果更准确;本文的三次重复结果非常一致

  • 快速测定亲和力,更加定量化地表征分子互作; 比如本文也用了IP或者其他标记方法来测试受体与细胞因子的互作,最终还是用Octet® 来定量检测两者互作

  • 无洗涤步骤,可测弱亲和力(解离快)

  • 写入了美国药典,文章多,认可度广

  • 万金油技术,可以用与检测DNA,小分子,蛋白质等各种生物分子

  • 操作简便,耗材及维护成本低


最后,祝愿大家可以用赛多利斯神器发好文章!

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《实时活细胞分析开启免疫细胞杀伤实验新格局》

-参考文献-

  1. γδ T cells are effectors of immunotherapy in cancers with HLA class I defects. Nature (2023)

  2. Dome1–JAK–STAT signaling between parasite and host integrates vector immunity and development, Science (2023). DOI: 10.1126/science.abl3837

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